پویاژن آزما

شناسایی باکتری مجهول با استفاده از 2 روش میکروبی و مولکولی

فهرست مطالب

اگر تجربه کار در آزمایشگاه تحقیقاتی یا نمونه گیری از طبیعت داشته باشید، حتما برای شما پیش آمده که با یک کشت متشکل از چند نوع باکتری، با کلونی های مختلفی از باکتری مجهول، از نظر شکل و اندازه روبرو شده باشید. همچنین اگر رنگ آمیزی گرم هم انجام داده باشید در زیر میکروسکوپ نیز چندین نوع مختلف باکتری خواهید دید.

اگر نمی دانید چطور باید باکتری های مختلف یک نمونه مخلوط و مجهول را جداسازی و شناسایی کنید در این مقاله با ما همراه باشید.

شکل1-نمونه ای از کشت مخلوط؛ چند نوع کلونی در تصویر مشاهده می کنید؟

چطور باکتری ها را از هم جدا کنم؟

همانطور که در شکل 1مشاهده میکنید، امکان برداشتن تک کلونی با لوپ وجود ندارد؛ یعنی کلونی های مختلف انقدر نزدیک به هم هستند که عملا اینکار ممکن نیست. فرض کنید ما میخواهیم باکتری مجهول دارای کلونی نارنجی رنگ موجود در تصویر بالا را  از سایر باکتری ها جدا کنیم. برای اینکار دو را داریم:

کشت چند مرحله ای

اگر کلونی یک خصوصیت بارز مثل پیگمنت داشته باشد سعی کنید یک کلونی از باکتری مجهول را برداشته و کشت 4 مرحله ای انجام دهید. (اگر انواع روش های کشت را نمی شناسید به این مقاله مراجعه کنید.) بعد از انکوباسیون کشت و رشد باکتری ها احتمالا باز هم یک کشت مخلوط خواهید داشت؛ اما مطمئنا به شلوغی و تنوع کشت قبل نیست. مانند شکل 2 که تقریبا می توان دو نوع کلونی درون آن مشاهده کرد. اغلب کلونی ها نارنجی رنگ هستند (در اینجا کلونی مورد نظر ما به این رنگ است) اما تعدادی کلونی کرم رنگ هنوز در میانه خط کشت مشاهده می شود.

شکل 2-مرحله دوم خالص سازی کشت مخلوط- تقریبا 2 نوع کلونی در ظرف کشت مشاهده می شود.

در این مرحله اگر موفق به گرفتن تک کلونی از باکتری مورد نظر خود شدید می توانید با کمک لوپ و با رعایت دقت، یک تک کلونی برداشته و مجدد پاساژ (کشت مجدد) بدهید. اگر تازه کار هستید ممکن است این کار چند بار طول بکشد پس ناامید نشوید! فقط در نظر داشته باشید که تعداد پاساژ بیش از حد باکتری را تضعیف می کند. پس اگر موفق به جدا سازی نشدید به مرحله قبل برگشته مجدد کشت بدهید. در پایان می توانید همانند شکل زیر یک کشت خالص به دست بیاورید.

خالص سازی باکتری مجهول

شکل 3-باکتری خالص شده با پیگمنت نارنجی

همانطور که مشاهده کردید، جدا سازی باکتری که دارای کلونی با یک خاصیت شاخص، مثل پیگمنت یا شکل ظاهری کلونی خاص می باشد امکان پذیر است. اما اگر شکل کلونی ها متفاوت نبودند، مثلا در کشتی که از باکتری آب دریا گرفته شده چندین نوع باکتری از جنس هالوموناس وجود دارد که همگی مورفولوژی ظاهری یکسانی دارند. در این صورت به سراغ روش دوم می رویم.

شرکت پویاژن آزما آزمایشگاه مجاز غذا و دارو می باشد. برای انواع خدمات مربوطه به این لینک مراجعه کنید.

کشت با استفاده از رقیق سازی

در این صورت می توانیم با تهیه سه رقت سریالی و کشت چمنی روی پلیت آگار جدا سازی را انجام دهیم. این کشت را باید به گونه ای انجام دهیم که درون پلیت کلونی های تک و جدا از هم ببینیم. پس از به دست آوردن تک کلونی با برداشتن آن با لوپ و انجام کشت 4 مرحله ای در پلیتی جدید، باکتری مجهول خالص شده را خواهیم داشت.

شناسایی مولکولی باکتری

بعد از به دست آوردن کلونی تک سعی کنید از همان یک کلونی استخراج DNA را انجام بدهید. برای اینکار به یک کیت با کیفیت و مناسب احتیاج خواهید داشت که توانایی جداسازی DNA از مقدار کم باکتری را داشته باشد. پس از جدا سازی DNA باید PCR انجام بدهید. روش انجام PCR مختص به شناسایی مولکولی در این مقاله به طور مفصل آورده شده است.

از اینکه این مقاله را تا انتها خواندید از شما سپاسگزاریم

برای جداسازی انواع DNA و باکتری می توانید از کیت های پویاژن آزما تهیه کنید. برای خرید کیت استخراج باکتری کلیک کنید

 

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

بهاره حسینی
کارشناس بیوتکنولوژی از دانشگاه خوارزمی
تخصص در بیوانفورماتیک و میکروب شناسی محیطی

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه