پلاسمیدها و انواع آن
پلاسمید قطعه ای کوچک و حلقوی از ملکول DNA است که جدا از کرموزوم اصلی باکتری است. همانند سازی پلاسمیدها جدا از همانندسازی DNA ژنومیک انجام می گردد. اولین بار زیست شناس امریکایی، جایوا لدربرگ در سال 1952 واژه پلاسمید را به کار گرفت.
پلاسمیدها به طور طبیعی دارای ژن های مختلفی به منظور حفظ بقا یا مقابله با دیگر باکتری های رقیب در محیط هستند. مثل ژن تولید کننده آنتی بیوتیک، ژن مقاومت به آنتی بیوتیک و یا ژن های مربوط به تجزیه قندهای پیچیده. پلاسمیدهای مختلفی می توانند همزمان در یک سلول باکتری وجود داشته باشند. پلاسمیدها معمولا دارای یک محل آغاز همانند سازی (ori) هستند که همانند سازیشان از همان نقطه آغاز می شود. به صورت طبیعی پلاسمیدها در انواع باکتری ها، آرکی باکتری ها، قارچ ها و گیاهان مشاهده می شود اما به صورت مصنوعی می توان آن ها رو به سلول های جانوری نیز منتقل کرد.
اندازه آن ها معمولا بین 1 تا 900 کیلوباز متغیر است. از نظر تعداد درون یک سلول نیز از یک تا هزاران کپی از پلاسمید می تواند وجود داشته باشد.
وکتورها
وکتورها در واقع نوعی از پلاسمیدها هستند که در مهندسی ژنتیک به کار گرفته می شوند. می توان با کمک وکتورها یک ژن خاص را تکثیر یا بیان کرد. وکتور معمولا دارای یک ژن مقاومت به آنتی بیوتیک، MCS و یک پروموتر قوی پس از جایگاه MCS می باشد. درون جایگاه MCS معمولا چندین سایت آنزیم محدود کننده وجود دارد که با استفاده از هضم آنزیمی وکتور و دو سر ژن می توان این دو را با کمک آنزیم لیگاز به یکدیگر متصل کرد. پس از ورود ژن جدید به وکتور با اضافه کردن آنتی بیوتیک مخصوص وکتور به محیط کشت باکتری های دریافت کننده وکتور نوترکیب رشد می کنند و باقی باکتری ها امکان رشد در این محیط را نخواهند داشت. به این صورت باکتری هایی که به اصطلاح نوترکیب شده اند از بقیه باکتری ها جدا می شوند.
Circular map of plasmid pDTC28 (GenBank KU238092).
ویژگی انواع وکتورها
انواع وکتورها را از نظر تعداد درون میزبان می توان به دو دسته High copy number و Low copy number تقسیم کرد.وکتورهای High copy number به علت تکثیر بالا درون سلول میزبان به وکتورهای کلونینگ نیز معروف هستند و معمولا برای تکثیر زیاد یک پلاسمید نوترکیب از آن ها استفاده می کنند.
دیگر ویژگی دیده شده در وکتورها ناسازگاری نام دارد. وقتی وجود یک وکتور خاص مانع از وارد شدن وکتور دیگری می شود این دو وکتور نسبت به هم ناسازگار نامیده می شود. این اتفاق زمانی رخ می دهد که دو پلاسمید مختلف از اجزا مشترکی برای همانندسازی استفاده می کنند؛ ر نتیجه بین دو وکتور رقابت به وجود می آید و پلاسمید قوی تر در سلول باقی می ماند.
Phylogenetic tree of the E. coli donor and recipient strains,
inferred using Bayesian inference on a core genome alignment.
شرکت پویاژن آزما آزمایشگاه مجاز غذا و دارو می باشد. برای انواع خدمات مربوطه به این لینک مراجعه کنید.
روش های جداسازی پلاسمید:
روش های جداسازی مختلفی برای استخراج پلاسمید وجود دارد مثل روش جوشاندن یا boiling ، فنل کلروفرم، جداسازی با کمک نمک ها و بافرهای خاص به صورت دستی. اما این روش ها معمولا علی رغم سادگی ایرادات زیادی همچون پایین بودن بازده، بالا بودن میزان آلودگی پروتئنی و RNA و … را دارا هستند. پس چاره چیست؟
محققان زیادی روش های مناسب و پربازده را بهینه سازی میکنند و به صورت کیت آماده استفاده در بازار به فروش می رسانند، این کیت ها معمولا چون توسط افراد با تجربه ساخته می شوند دیگر مشکلات روش های دستی را نداشته و هم چنین کیفیت و بازده بالایی دارند.
برای جداسازی انواع DNA و باکتری می توانید از کیت های پویاژن آزما تهیه کنید. برای خرید کیت استخراج پلاسمید کلیک کنید
کیت استخراج پلاسمید پویاژن آزما با استفاده از مینی ستون جداسازی را انجام داده، و با دارا بودن بافرها و ستون های با کیفیت بهترین بازده را حتی در جداسازی پلاسمید های Low copy number ارائه می کند. قیمت مناسب در مقابل رقیب های خارجی، بازده بالا، زمان بری کم و کیفیت بالا و ثابت پلاسمید جداسازی شده از مزایای کیت استخراج پلاسمید پویاژن آزما می باشد. برای خرید این محصول و دیدن توضیحات بیشتر می توانید به این لینک مراجعه کنید. هم چنین می توانید برای اطلاعات بیشتر با شماره 40443676 یا ایمیل Poyagene@gmail.com در تماس باشید.
