آموزش کشت سلول- اصول کار با سلول

قبل از ورود به اتاق کشت و کار با سلول و یا بافت حتما یک سری نکات را رعایت کنید. اگر قرار بر این است که با سلول یا بافت کار کنید حتما این مقاله رو تا آخر بخونید. نکاتی گفته می شود که بسیار لازم است و خیلی از آن ها بصورت تجربی بدست می آیند.

آموزش نکات مهم برای کشت سلول و بافت و کار در اتاق کشت

پیش از ورود

اولین جایی که قبل از ورود به اتاق اصلی کشت وارد می شود، بخش مخصوصی است که در آنجا تعویض لباس انجام می دهید. (مثل هر آزمایشگاهی باید حتما روپوش تمیز بپوشید و هیچوقت با لباس بیرون با سلولها کار نکنید، در غیر این صورت احتمال آلودگی زیاد می شود)، دست های خود را شسته و دستکش به دست کنید. برای ورود به بخش بعدی اتاق کشت دمپایی مخصوص یا کاور کفش بپوشید. در این بخش معمولا بن ماری، کمد حاوی وسیله های آزمایش، یخچال و فریزر قرار دارد. دقت کنید که درها را حتما پشت سر خود ببندید تا هوا به درستی جریان پیدا کرده و استریل شود (نسبت به سطح اتاق کشت).

بسته به تستی که قرار است انجام شود وسیله ها و مواد مورد نیاز را از کمد و یخچال فریزر بردارید. پلاستیک فریزر، پارافیلم، اسپری الکل ۷۰ درصد و گاز استریل یا دستمال برای تمیز کردن استفاده می شوند. حالا وارد بخش اصلی اتاق کشت شوید.

تصویر ۳ بخش اتاق کشت سلول و وسایلی که در هر بخش قرار دارد

داخل بخش اصلی اتاق کشت

وقتی وارد بخش اصلی اتاق کشت شدید این دستگاه ها را مشاهده می کنید (حداقل امکانات لازم):

1. هود لامینار

2. انکوباتور CO2 دار مخصوص کشت سلول

3. میکروسکوپ اینورت

4. سانتریفیوژ

اول از همه برای کشت سلول با هود لامینار کار خواهید کرد و باید سطح زیر هود را استریل کنید. اول هود را روشن  کنید، دکمه لامپ و هود را بزنید. زیر هود را الکل بپاشید و با گاز استریل کامل تمیز کنید. وسیله های مورد نظر (نه مواد) را که از قبل اتوکلاو شده اند یا یک بار مصرف و استریل هستند را با الکل تمیز کنید و زیر هود بگذارید. در هود را ببندید، کلید لامپ و هود رو خاموش کنید و لامپ UV را روشن کنید. حدود ۱۰ تا ۲۰ دقیقه اجازه دهید تا زیر هود استریل شود. بعد از 20 دقیقه UV را خاموش و فن را روشن کنید و در هود را حدود 2 سانت باز کنید تا هوا بدون اوزون (اکسیژن در مقابل UV به اوزون تبدیل می شود) بشود.

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

مواد مورد استفاده

در مدتی که هود استریل می شود، موادی که برای کشت سلول لازم دارید (بسته به نوع آزمایش) را آماده کنید و اگر محیط آماده و کامل ندارید، باید محیط کشت، سرم (برای مثال می توانید از FBS یا سرم جنین گاوی استفاده کنید) و آنتی بیوتیک penstrep (مخلوط پنی سیلین و استرپتومایسین که باکتریهای گرم مثبت و منفی را از بین می برد) را از یخچال (محیط کشت) و فریزر (آنتی بیوتیک و سرم) خارج کنید. و داخل بن ماری با دمای ۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید. هر محیط کامل شامل ۱۰ درصد سرم و ۰/۱ درصد آنتی بیوتیک می شود.

برای کشت سلول باید حتما محیط برای ریختن روی سلول ها گرم باشد و به ۳۷ درجه رسیده باشد و در غیر این صورت به سلولها شوک وارد می شود.

۸ نکته مهم برای کشت سلول

بطور کلی برای کشت سلولها ۸ نکته را باید رعایت کنید:

1. قبل از شروع کار وقتی لامپ UV را خاموش کردید، هود را روشن و درب هود را باز کنید و اجازه دهید حدود ۱۰ دقیقه هود باز بماند تا اوزون های تشکیل شده تجزیه شده و از بین بروند.

2. هنگام کار زیر هود هر وسیله ای که از خارج از هود وارد میشود، حتی دست شما، باید الکل کشی شود.

3. حتما هر ماده ای که نیاز است روی سلولها ریخته شود را به دمای ۳۷ درجه برسانید و گرنه به سلولها شوک وارد میشود.

4. موقع حمل فلاسکی که سلول در آن قرار دارد را حتما اوریب نگه دارید و مراقب باشید که محیط کشت به در فلاسک برخورد نکند (اگر فلاسک فیلتردار باشد فیلتر آلوده میشود و باید سریع درب و محیط کشت را عوض کنید و ترجیحا فلاسک را تعویض کنید) و سعی کنید سلول ها مدت طولانی بدون محیط نمانند ( اگر طول بکشد به سلولها شوک وارد میشود و نباید زیاد در مجاورت هوا قرار بگیرند و خشک باشند).

5. حتما با روپوش تمیز و دستکش کار کنید.

6. هر سلول نکته های خاص خودش رو دارد و شما باید با مراعات و احتیاط کار کنید تا بفهمید چه شرایطی برای سلول شما بهتر است.

7. سعی کنید هر روز یا حداکثر یک روز درمیان به سلول هایتان سر بزنید تا اگر به تعویض محیط نیاز دارند (که معمولا با زرد شدن محیط مشخص میشود) یا تراکم آنها زیاد شده، پاساژ بدهید.

8. بعد از استفاده از مواد حتما درب فالکون ها را پارافیلم بپیچید. محیط کشت (کامل و غیرکامل) را در یخچال و تریپسین، سرم و آنتی بیوتیک را در فریزر قرار بدید.

می توانید اصول کشت سلول رو در سایت ترموفیشر به زبان انگلیسی با توضیحات کاملتر بخوانید.

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

برای مراجعه به صفحه تصفیه فاصلاب صنعتی میتوانید از این لینک استفاده کنید .