PCR_tubes

اصول RT-PCR با پروب

 

اصول RT-PCR با پروب

 

برای بررسی حضور یک ژن خاص در نمونه و یا اندازه گیری میزان بیان یک ژن بصورت کمی از ریل تایم RT-PCR استفاده می کنیم. می توانیم با استفاده پرایمرهای مرتبط با یک بیومارکر اختصاصی و طراحی پروب، یک بیماری را تشیص دهیم .

ابتدا برای جدا شدن دو رشته DNA یا cDNA باید دما بالا برود (مانند PCR معمولی) . سپس در دمای اتصال (Annealing) پرایمر ها و پروب که بصورتی طراحی شده تا بین دو پرایمر قرار بگیرد، به ژن مورد نظر متصل می شوند .

 

مقدمات RT-PCR

پروب به فلورسنت و کوئنچر آن متصل شده

توالی پروب به این صورت است که یکی از نوکلئوتیدها به یک فلورسنت متصل شده است و نوکلئوتید انتهای مخالف آن به کوئنچر آن فلورسنت متصل شده تا مانع از ساتع شدن نور فلورسنت شود . دستگاه وارد مرحله ی طویل سازی (extension) می شود . با این اتفاق ، آنزیم پلیمراز توالی را در ادامه ی پرایمر ها می سازد . سپس به توالی پروب که می رسد نوکلئوتیدهای آن را یکی یکی بر می دارد و نوکلئوتید جدید می گذارد . درنتیجه ، فلورسنت از کوئنچر خود دور شده و نور ساتع می کند . حالا دستگاه نور ساتع شده را دریافت می کند .

 

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

 

مقدمات RT-PCR

فلورسنت دور از کوئنچر از خود نور ساتع میکند

 

هرچه نور ساتع شده بیشتر شود نمودار دستگاه بالاتر می رود . این نمودار میزان نور فلورسنت بر اساس سیکل را نشان می دهد . هر نمونه ای که نمودار آن در سیکل کمتر (زودتر) بالا بیاید یعنی میزان بیان بیشتری دارد . از آنجا که شما در لحظه، پس از چند دقیقه با بالا آمدن نمودار متوجه حضور ژن خود می شوید و حتی میزان هر ژن را در هر نمونه (بصورت کیفی) میتوان در طول انجام تست متوجه شد ، به آن Real time می گویند . برای خواندن یک مقاله در همین زمینه به اینجا بروید .

 

مقدمات RT-PCR

نمودار Amplification در RT-PCR

امیدواریم از مقاله RT-PCR توسط پویاژن آزما بهره برده باشید

 

برای رفتن به تصفیه فاضلاب صنعتی  از این لینک استفاده کنید.

 

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

منوی دسته بندی های خود را در تنظیمات قالب -> هدر -> منو -> منو موبایل (دسته ها) تنظیم کنید
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
برای دیدن نوشته هایی که دنبال آن هستید تایپ کنید.
فروشگاه
لیست علاقه مندی ها
0 مورد سبد خرید
حساب من