پویاژن آزما

اصول RT-PCR با پروب

فهرست مطالب

برای بررسی حضور یک ژن خاص در نمونه و یا اندازه گیری میزان بیان یک ژن بصورت کمی از ریل تایم RT-PCR استفاده می کنیم. می توانیم با استفاده پرایمرهای مرتبط با یک بیومارکر اختصاصی و طراحی پروب، یک بیماری را تشیص دهیم .

ابتدا برای جدا شدن دو رشته DNA یا cDNA باید دما بالا برود (مانند PCR معمولی) . سپس در دمای اتصال (Annealing) پرایمر ها و پروب که بصورتی طراحی شده تا بین دو پرایمر قرار بگیرد، به ژن مورد نظر متصل می شوند .

 

مقدمات RT-PCR

پروب به فلورسنت و کوئنچر آن متصل شده

توالی پروب به این صورت است که یکی از نوکلئوتیدها به یک فلورسنت متصل شده است و نوکلئوتید انتهای مخالف آن به کوئنچر آن فلورسنت متصل شده تا مانع از ساتع شدن نور فلورسنت شود . دستگاه وارد مرحله ی طویل سازی (extension) می شود . با این اتفاق ، آنزیم پلیمراز توالی را در ادامه ی پرایمر ها می سازد . سپس به توالی پروب که می رسد نوکلئوتیدهای آن را یکی یکی بر می دارد و نوکلئوتید جدید می گذارد . درنتیجه ، فلورسنت از کوئنچر خود دور شده و نور ساتع می کند . حالا دستگاه نور ساتع شده را دریافت می کند.

مقدمات RT-PCR

فلورسنت دور از کوئنچر از خود نور ساتع میکند

 

هرچه نور ساتع شده بیشتر شود نمودار دستگاه بالاتر می رود . این نمودار میزان نور فلورسنت بر اساس سیکل را نشان می دهد . هر نمونه ای که نمودار آن در سیکل کمتر (زودتر) بالا بیاید یعنی میزان بیان بیشتری دارد . از آنجا که شما در لحظه، پس از چند دقیقه با بالا آمدن نمودار متوجه حضور ژن خود می شوید و حتی میزان هر ژن را در هر نمونه (بصورت کیفی) میتوان در طول انجام تست متوجه شد ، به آن Real time می گویند . برای خواندن یک مقاله در همین زمینه به اینجا بروید .

 

مقدمات RT-PCR

نمودار Amplification در RT-PCR

امیدواریم از مقاله RT-PCR توسط پویاژن آزما بهره برده باشید

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

بهاره حسینی
کارشناس بیوتکنولوژی از دانشگاه خوارزمی
تخصص در بیوانفورماتیک و میکروب شناسی محیطی

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه