پویاژن آزما

شمارش سلول با لام نئوبار

شمارش سلول با لام نئوبار
فهرست مطالب

در این مقاله از پویاژن آزما میخواهیم به نحوه شمارش سلول با لام نئوبار بپردازیم.

وقتی نیاز دارید که سلول ها را در پلیت های چند خانه کشت بدهید و تعداد سلول کشت شده برای شما مهم است، نیاز دارید با استفاده از لام نئوبار یا هموسیتومتر شمارش سلول ها را انجام دهید. این مرحله از کشت سلول به دقت بیشتری نیاز دارد که در ادامه پروتکل و فرمولهای مورد نیاز را مشاهده می کنید.

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و کارآموزی مهندسی ژنتیک یعنی انجام دادن تمام تکنیک های میکروبی و مولکولی توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

کیت استخراج DNA از بافت و سلول  تولیدی پویا ژن آزما با کیفیت بالا استخراج ژنوم انجام داده و نتایج PCR و تعیین سکانس عالی خواهید داشت.

ویدیو آموزش شمارش سلول

آماده سازی لام نئوبار برای شمارش سلول

برای شمارش سلول ها ابتدا باید سلول های چسبیده را مانند آنچه در پاساژ سلول انجام می شود، تیپریپسینه کنید که این آموزش را میتوانید از آموزش کشت سلول مشاهده کنید . پس از سانتریفیوژ سلولها محیط رویی را دو ریخته و سلولها را در یک سی سی محیط کشت بطور کامل سوسپانسیون می کنید. لام نئوبار و لامل را با اتانل ۷۰ درصد تمیز کنید و لامل را روی لام نئوبار قرار دهید.

لام نئوبار

لام نئوبار و لامل را با الکل ۷۰ درصد تمیز کنید

 

لامل

لامل را روی لام قرار دهید.

پیشنهاد: خرید کیت استخراج DNA پویاژن آزما

آماده سازی نمونه برای شمارش سلول با هموسیتومتر

به اندازه حجم سلول یعنی یک سی سی تریپان بلو اضافه کنید (البته برای صرفه جویی میتوانید ۱۰ میکرولیتر از سلول ها را با ۱۰ میکرولیتر از تریپان بلو مخلوط کنید) . به خوبی پیپتاژ کنید تا سلول ها کامل در تریپان بلو سوسپانسیون شوند . سپس ۱۰ میکرولیتر از ترکیب را به دقت به زیر لاملی که روی لام نئوبار یا هموسیتومتر قرار دارد وارد کنید . (مانند کلیپ)

تریپان بلو

نحوه وارد کرد سوسپانسیون سلولی به لام نئوبار

نحوه شمارش سلول

سپس لام نئوبار را زیر میکرویکوپ قرار دهید . هر طرف لام از ۹ مربع بزرگ تشکیل شده که روش شمارش سلول ها داخل این مربع ها میتواند متفاوت باشد . ما به این صورت انجام می دهیم که ۴ مربع گوشه و یک مربع وسطی را می‌شماریم . تریپان بلو وارد سلول های مرده میشود . ما آنها را به رنگ  آبی می بینیم اما سلول های زنده بصورت شفاف مشاهده می شوند .

کشت سلول

سلول های زنده شفاف و سلول های مرده آبی هستند

 

حتما باید مربع ها را به ترتیب بشمارید تا فراموش نکنید کدام یک شمارش شده است . برای شمارش سلول هایی که روی ضلع های مربع قرار دارند یک قانون می گذاریم . زیرا فقط ضلع های بالا و سمت چپ را بشماریم ( اگر از مربع بالا سمت چپ شمارش را آغاز کردید) . شمارش سلول ها را به دقت انجام دهید . سلولهای شفاف را در دسته سلول های زنده و سلول های آبی در دسته سلول های مرده شمارش می شوند . همچنین در نظر داشته باشید که ذراتی که سیاه هستند و سلول نیستند را شمارش نکنید.

لام نئوبار

نحوه شمارش سلول های روی ضلع های مربع ها

محاسبه غلظت سلول

فرمول شمارش سلول با لام نئوبار

پس از اتمام شمارش به محاسبات می پردازیم . ابتدا می توانیم درصد سلول های زنده و رشد یافته را محاسبه کنیم :

فرمول محاسبه درصد سلول زنده

تعداد متوسط سلول ها در هر مربع هم به این صورت محاسبه می شود :

فرمول محاسبه میانگین سلولهای زنده در هر مربع

ضریب رقت نیز همیشه ۲ هست . به این دلیل که شما باید یک برابر حجم از سوسپانسیون سلول ، تریپان بلو اضافه کنید :

فرمول ضریب رقت

برای محاسبه غلظت سلول یعنی تعداد سلول ها در یک میلی لیتر باید تعداد متوسط سلول در هر مربع را در ضریب رقت و عکس حجم یک مربع ضرب کنید که حجم تمامی مربع های یکسان و برابر با ۴-۱۰ می باشد :

فرمول نهایی شمارش سلول با لام نئوبار

حالا شما می دانید که هر میلی لیتر از سوسپانسین سلول چه تعداد سلول را شامل می شود . پس می تواند تعداد مشخص از سلول را درون هر چاهک از پلیت کشت دهید و تیمار مورد نیاز را انجام دهید .

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید، به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

مراجعه به صفحه تصفیه فاصلاب صنعتی 

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

بهاره حسینی
کارشناس بیوتکنولوژی از دانشگاه خوارزمی
تخصص در بیوانفورماتیک و میکروب شناسی محیطی

8 نظر در “شمارش سلول با لام نئوبار

  1. نصیری گفت:

    شما درجه یکید ممنون واقعا

    1. admin گفت:

      خیلی ممنون. خوشحالیم براتون مفید بوده. بازم آموزشی مدنظرتون بود بگید اگر میتونستیم حتما مطلب میذاریم درباره ش

  2. حانیه گفت:

    لذت بردم از آموزشتون
    تنها سایتی که کپی نکرده بود شما بودید

    1. admin1 گفت:

      خوشحالیم براتون مفید بوده. تمامی مطالب رو تیم علمی خودمون بر اساس تجربیات و ترجمه مقالات مینویسن تا برای مخاطب مفید باشه.

  3. Yeganeh Davoudi گفت:

    بسیار عالی و مفید.. با آرزوی بهترین ها برای شما

    1. admin1 گفت:

      خوشحالیم برای شما مفید بوده.

  4. Raha گفت:

    بسیار عالی و دقیق
    سپاس از زحمات شما

    1. نویسنده پویاژن گفت:

      خوشحالیم براتون مفید بوده

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه