مرحله لایگیشن

مرحله لایگیشن troubleshooting

در این مقاله از پویاژن میخواهیم به سوالات متداول مرحله لایگیشن بپردازیم .

 

برای مشاوره و کارآموزی برای مهندسی ژنتیک و کلونینگ ژن میتوانید با ما تماس بگیرید

09101438051

02140443676-7

 

اصول مهندسی ژنتیک و کلونینگ ژن را در مقالات قبل توضیح دادیم . این قسمت را می خواهیم به سوالات متداول راجع به مرحله لایگیشن اختصاص دهیم . برای مطالعه آموزش کلونینگ ژن- مرحله لایگیشن به اینجا مراجعه نمایید .

 

برای انجام لایگیشن به چه نمونه هایی برای کنترل نیاز دارم؟

برای انجام لایگیشن باید حتما یک کنترل پلازمید تنها + لیگاز داشته باشید. این به شما اطمینان میدهد که دایجست و لایگیت کامل انجام شده و اگر با فسفاتاز تیمار کرده بودید این تیمار به خوبی انجام شده یا نه.

وقتی آن را کشت میدهید و با رشد کردن در محیط آنتی بیوتیک دار مطمئن میشوید که ترنسفورم و لایگیشن به خوبی انجام شده است (اطلاعات بیشتر در بخش انتخاب کلونی که به زودی توسط تیم پویاژن آزما منتشر خواهد شد).

 

 

اما برای ترابل شوتینگ و بررسی خطاهای احتمالی میتوانید این کنترل ها را نیز داشته باشید:

  • وکتور برش نخورده بدون لیگاز، برای بررسی قابلیت رشد سلولهای مستعد شده . (مطالعه در بخش ترنسفورم که به زودی منتشر خواهد شد) و تایید قابلیت مقاوت به آنتی بیوتیک پلاسمید.

  • وکتور برش خورده بدون لیگاز، عدم رشد در نتیجه اطمینان از صحت دایجست و صحت لایگیشن در صورت رشد وکتور برش خورده با لیگاز

  • ژن الحاقی یا آب، به عنوان کنترل منفی عمل میکند و اگر یک کلنی هم در ترنسفورم این نمونه رشد کند به معنای آلوده بودن لیگاز یا یکی از مواد به پلازمید است.

 

برای رفتن به صفحه فروشگاه و خرید کیت استخراج دلخواه خود از این لینک استفاده کنید.

 

میزان وکتور ژن الحاقی و نسبت آنها در لایگیشن را چگونه بفهمم؟

معمولا نسبت 3 به یک برای ژن و وکتور (ژن 3 برابر وکتور) مناسب است. اما میتوانید اگر لایگیشن شما با این نسبت عمل نکرد و یا کلونی های پیچیده ای داشتید، برای لایگیشن بهتر و مناسب این نسبت را اپتیمایز کنید.  اگر نسبت 3 به یک به شما میانگین سایز ژن و پلازمید را داد این به مولاریته ی انتهای آزاد DNA موجود و در دسترس برای لیگاز مرتبط است.

بطور ساده دو انتها برای هر DNA با هر اندازه ای وجود دارد، برای لایگیشن بهتر در انتهای چسبنده شما برای هر ژن الحاقی باید 3 انتها برای هر انتهای در دسترس وکتور در نظر بگیرید (و برای انتهای صاف میزان بیشتری در نظر بگیرید) . شما میتوانید به راحتی از سایت اندازه گیری لایگیشن استفاده کنید.

 

 

برای رفتن به تصفیه فاضلاب صنعتی  از این لینک استفاده کنید.

 

 

 

 

سرتیترها

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

منوی دسته بندی های خود را در تنظیمات قالب -> هدر -> منو -> منو موبایل (دسته ها) تنظیم کنید
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
برای دیدن نوشته هایی که دنبال آن هستید تایپ کنید.
فروشگاه