پویاژن آزما

پروتکل کشت باکتری های بی هوازی

پروتکل کشت باکتری های بی هوازی
فهرست مطالب

از نظر آزمایشگاه تشخیص پزشکی، اصلی ترین باکتری های بی هوازی بیماری زا بر اساس محل آنها در بدن متفاوت اند. در مقاله قبل درباره روش های کشت بی هوازی باکتری ها صحبت کردیم. در این مقاله شرکت دانش بنیان پویاژن آزما و آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو قصد دارد بطور مفصل روش های کشت باکتری های بی هوازی را بررسی کند.

کیت استخراج DNA از باکتری تولیدی پویا ژن آزما از سخت ترین نمونه های باکتری مانند استافیلوکوکوس اورئوس با کیفیت بالا استخراج کرده و نتایج PCR و تعیین سکانس عالی خواهید داشت. با به صرفه ترین قیمت و بیشترین کیفیت.

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید، به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

رابطه اکسیژن و رشد باکتری

  1. سه عدد لوله حاوی Eugon agar deep را ذوب کرده و چند دقیقه حرارت داده تا اکسیژن کاملا زدوده گردد.
  2. لوله ها را در حمام آب گرم 58-50 درجه سرد کنید.
  3. با قلم مناسب، هر لوله را با نام باکتری که تلقیح می گردد، نام خودتان و تاریخ را یادداشت کنید.
  4. بطور استریل هر لوله سرد شده را با یک یا دو لوپ پر از یک باکتری (سودوموناس آئروژینوزا، کلستریدیوم اسپوروژنز و E. coli) تلقیح کنید.
  5. باکتریها را بدون هوا دادن از طریق قرار دادن در بین دو کف دست و چرخاندن، در داخل محیط مخلوط کنید.
  6. اجازه دهید آگار سفت شده و سپس سه لوله را در 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید.
  7. هر لوله را از لحاظ رشد بررسی کرده و نتایج را یادداشت کنید.

کشت مایع باکتری های بی هوازی

  1. سه لوله حاوی محیط مایع تیوگلیکولات حرارت داده شده را با نام باکتری، نام خودتان و تاریخ علامت گذاری کنید.
  2. بصورت استریل هر لوله را با یک باکتری تلقیح کنید. جهت جلوگیری از اکسیده شدن محیط، آنها را هم نزنید. متیلن بلو یا resazurin به عنوان نشانگر اکسیداسیون-احیا در محیط وجود دارد. اگر بیش از 1/3 محیط آبی یا قرمز شده باشد، لوله باید در حمام آب گرم مجددا حرارت داده شود تا اکسیژن حذف گردد.
  3. لوله ها به مدت 24-48 ساعت در 35 درجه قرار داده شود.
  4. هر لوله را از لحاظ رشد بررسی کرده و نتایج را یادداشت کنید.

کشت باکتری های بی هوازی بر روی پلیت

  1. یک پلیت تریپتیک سوی آگار ، یک پلیت آگار بی هوازی برور و یک پلیت برور با پوشش آماده کنید. با استفاده از قلم پشت هر پلیت را دوقسمت کرده، در یک قسمت نام سودوموناس آئروژینوزا و در قسمت
    دیگر نام کلستریدیوم اسپوروژنز را یادداشت کنید. 3 عدد پلیت مشابه قبلی را با سودوموناس آئروژینوزا و E. coliعلامت گذاری کنید. این 3 پلیت رشد بی هوازی اختیاری را نشان می دهند.
  2. با استفاده از لوپ تلقیح، مرکز هر قسمت را با باکتری مشخص شده کشت دهید.
  3. پلیت تریپتیک سوی آگار را در 00درجه در شرایط هوازی معمولی قرار دهید.
  4. با احتیاط پلیت برور را با پوشش مخصوص برور استریل بپوشانید. دیواره حلقوی پوشش باید تا سطح آگار فشار داده شود ولی داخل آگار نشود. سپس در 35 درجه قرار داده شود.
  5. پلیت بی هوازی را در جار بی هوازی یا در کیسه بی هوازی قرار دهید.
  6. تمام نمونه ها مدت 24-48 ساعت در 35 درجه نگهداری و سپس نتایج یادداشت گردد.
سیستم گازپک

سیستم گازپک

کشت باکتری های بی هوازی بر روی سطح شیبدار لوله رایت (Wright)

  1. دو لوله حاوی محیط تریپتیک سوی آگار بصورت شیبدار را با سودوموناس آئروژینوزا و دو لوله دیگر را با کلستریدیوم اسپروژنز نام گذاری کنید.
  2. هر لوله را با باکتری مربوطه بصورت استریل تلقیح کنید.
  3. دو لوله (یک لوله از هر باکتری) را در بطور هوازی 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید.
  4. در دو لوله دیگر یک تکه پنبه را با ته لوپ تا تقریبا تماس با سطح آگار داخل کنید. در حالیکه دستکش در دست دارید، سطح بالای پنبه را با کریستالهای پیروگالول پر کرده و 1 ml از %10 NaOH به آن اضافه کنید.سریع درب لوله را با درپوش پلاستیکی بسته و آن را بر عکس کنید.
  5. لوله ها را در داخل جالوله ای قرار داده و در 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید. سپس نتایج را یادداشت کنید.

جداسازی بی هوازی ها از خاک

  1. یک اسپاتول از خاک در درون لوله حاوی محیط کشت مایع تیوگلیکولات بریزید.
  2. به مدت یک روز در 30 یا 37 درجه قرار دهید.
  3. محیط را جهت رشد باکتری از لحاظ ایجاد کدورت و تولید گازهای تخمیر بررسی کنید.
  4. اگر زمان اجازه می دهد از محیط رشد کرده بر روی پلیت دارای آگار بی هوازی برور کشت داده و در انکوباتور گازپک قرار دهید. سپس مورفولوژی کلنی ها را بررسی و نتایج را یادداشت کنید.

روش ساده جهت رشد بی هوازی ها

  1. بصورت استریل محیط کشت مایع تریپتیکیس سوی دارای اکسیراز مخصوص مایع و OxyDishدارای تریپتیکیس سوی آگار دارای اکسیراز مخصوص آگار را با سودوموناس آئروژینوزا، کلستریدیوم اسپروژنز و E. coli تلقیح کنید.
  2. نمونه را در 37درجه به مدت 24-48 ساعت قرار داده و سپس نتایج را یادداشت کنید.

تذکرات و نکات ایمنی

  1. اگر لوله درپیچ دار با هر محیط کشت (نظیر محیط مایع تیوگلیکولات) استفاده می گردد، درب آنها باید محکم بسته شده تا در هنگام قرار دادن در انکوباتور هوازی از نفوذ اکسیژن اتمسفری جلوگیری گردد.
  2. در جار گازپک بی هوازی، در پوش نباید محکم بسته شود تا اکسیژن باقی مانده در لوله ها بوسیله گاز هیدروژن تولیدی در سیستم خنثی گردد.

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

بهاره حسینی
کارشناس بیوتکنولوژی از دانشگاه خوارزمی
تخصص در بیوانفورماتیک و میکروب شناسی محیطی

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه