چربی ها ترکیبات با وزن مولکولی بالا هستند که دارای میزان زیادی انرژی ذخیره شده هستند. دو چربی مهم که بوسیله باکتری ها کاتابولیز می گردد تری گلیسیریدها (triacylglycerols) و فسفولیپیدها هستند. شرکت دانش بنیان و آزمایشگاه همکار غذا و دارو پویاژن آزما قصد دارد در این مقاله به توضیح تست بررسی هدیرولیز چربی میپردازیم.
مواد لازم برای بررسی هیدرولیز چربی
کشت پروتئوس میرابیلیس و استافیلوکوکوس اپیدرمایدیس درون TSB، پلیت حاوی spirit blue agar با %3 معرف لیپاز، لوپ، انکوباتور تنظیم شده در 35 درجه، قلم مناسب، شعله
مواردی که در تست هیدرولیز چربی فرا میگیرید:
- فهم واکنش بیوشیمیایی هیدرولیز چربی
- مشخص کردن توانایی باکتری در هیدرولیز چربی با تولید لیپاز اختصاصی
- توضیح چگونگی امکان مشخص کردن هیدرولیز لیپید بوسیله واکنش تغییر رنگ
- انجام مناسب آزمایش هیدرولیز چربی
اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید، به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.
09101438051 / 02140443676
اصول هیدرولیز چربی
تری گلیسیریدها بوسیله آنزیم هایی به نام لیپاز به گلیسرول و مولکول های اسید چرب آزاد هیدرولیز شده که در دیاگرام زیر نشان داده شده است. سپس مولکول های گلیسرول و اسیدهای چرب آزاد می توانند بوسیله سلول باکتری جذب شده و در ادامه از طریق واکنش های گلیوکلیز، مسیر بتا اکسیداسیون و چرخه سیتریک اسید متابولیزه گردند.
این چربی ها همچنین می توانند وارد مسیرهای متابولیکی دیگر شده و جهت سنتز فسفولیپیدهای غشاء مورد استفاده قرار گیرند. چون فسفولیپیدها اجزاء کاربردی تمام سلول ها هستند، توانایی باکتریها در هیدرولیز فسفولیپیدهای سلول میزبان فاکتور مهمی در گسترش باکتری های بیماریزا می باشد. علاوه بر آن وقتی که باکتری های تولید کننده لیپاز محصولات غذایی را آلوده کنند، با هیدرولیز چربی بوسیله این باکتری های چربی دوست، باعث ایجاد خسارت در این محصولات و در نهایت ترشیدگی و تعفن می گردند.
وقتی که این چربی ها به محیط کشت اضافه شده و باکتری چربی دوست بر روی آن کشت گردد، اطراف باکتری به علت آزاد شدن اسیدهای چرب اسیدی می گردد. با اضافه کردن معرف pH به محیط کشت امکان شناسایی هیدرولیز چربی ها بوسیله تغییر رنگ وجود دارد. به عنوان مثال محیط (SBA) spirit blue agar با معرف لیپاز بکتو دارای رنگ بنفش کمرنگ است. در اثر رشد باکتری چربی دوست و ایجاد pH اسیدی، در اطراف کلنی آن رنگ آبی ارغوانی ایجاد می گردد.
پروتکل تست آنالیز چربی
مرحله اول
1- با قلم ته یک پلیت SBAرا نصف کرده، نیمی از آن را با پروتئوس میرابیلیس و نصف دیگر را با استافیلوکوکوس اپیدرمایدیس علامت گذاری کنید. نام خود و تاریخ را نیز اضافه کنید.
2- با باکتریهای مشخص شده هر قسمت را بصورت نقطه ای (مانند شکل) کشت دهید.
3- پلیت را مدت 48-24 ساعت در 35 درجه قرار دهید.
مرحله دوم
1- پلیت را از نظر ظهور هیدرولیز لیپید بررسی کنید. هیدرولیز با ایجاد یک منطقه آبی رنگ در اطراف رشد باکتری ثابت می گردد که این رنگ آبی ارغوانی می گردد.
2- منطقه هیدرولیز را اندازه گیری کرده و نتایج را یادداشت کنید.
نکات ضروری
1- وقتی قصد مشاهده تغییر رنگ در محیط را دارید بهتر است محیط را در محلی با زمینه رنگ متفاوت قرار دهید.
2- بهتر است پلیت را در موقعیتهای مختلف نسبت به منبع نوری قرار داده و از بالا و پایین به محیط نگاه کنید.
هیدرولیز چربی. (a) روش کشت نقطه ای بر روی پلیت . spirit blue agar
(b) واکنش های مثبت و منفی
امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده، همچنین میتوانید درباره نکات کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی مطالعه کنید و اگر به این مبحث علاقمند هستید میتوانید از این لینک به زبان انگلیسی درباره آنزیم بتاگالاکتوزیداز مطالعه کنید.
