SIM test

تست SIM

تعدادی از پروتئین ها غنی از اسیدهای آمینه دارای سولفور نظیر سیستئین می باشند. وقتی این پروتئین ها بوسیله باکتریها هیدرولیز می گردند، این اسیدهای آمینه آزاد شده و جذب باکتری می گردند. سیستئین در حضور سیستئین دسولفوراز از طریق اضافه شدن هیدروژن از آب به آن ، اتم سولفور خود را از دست داده و بصورت گاز سولفید هیدروژن آزاد می گردد. در این مقاله آزمایشگاه همکار غذا و دارو پویاژن آزما قصد دارد بطور مفصل به توضیح پروتکل تست SIM بپردازد.

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051

02140443676

 

تولید سولفید هیدروژن و تحرک (SIM)

  • کشت 24-48 ساعته از کلبسیلا پنمومونیا، پروتئوس ولگاریس و سالمونلا تیفی موریوم در محیط TSB
  • شعله
  • سوزن کشت
  • رک
  • 3 لوله حاوی 3 عدد محیط تست تحرک (SIM agar(sulfide-hndole-motility
  • معرف کواکس
  • انکوباتور تنظیم شده در 35 درجه
  • قلم مناسب

با انجام این تست شما این موارد را یاد میگیرید:

1- درک فرایند بیوشیمیایی تولید سولفید هیدروژن بوسیله باکتری
2- توصیف دو راه تشخیص تولید سولفید هیدروژن
3- توصیف چگونگی تشخیص حرکت
4- انجام مناسب آزمایش سولفید هیدروژن و حرکت

اصول تست SIM

گاز سولفید هیدروژن همچنین ممکن است بوسیله احیای سولفورهای غیر آلی نظیر تیوسولفات (S2O32)، سولفات (SO42) یا سولفیت (SO32) تولید گردد. به عنوان مثال وقتی باکتری معینی تیوسولفات سدیم را جذب کند، می تواند آن را با استفاده از آنزیم تیوسولفات ردوکتاز به سولفیت احیا کند و گاز سولفید هیدروژن آزاد گردد.

تولید سولفید هیدروژن. باید توجه داشت که تمام باکتریها H2Sمثبت و متحرک یا H2Sمنفی و غیر متحرک نیستند. ممکن است ترکیبی از این نتایج وجود داشته باشد.

در این آزمایش ، محیط SIMکه دارای پپتون و تیوسولفات سدیم به عنوان سوبسترا و سولفات آمونیوم آهن Fe(NH4)SOبه عنوان معرف H2S است استفاده می گردد. سیستئین یکی از اجزاء پپتون است که در این محیط استفاده شده است. از آگار جهت جامد شدن محیط استفاده شده است. وقتی H2Sتولید شد با سولفات آمونیوم آهن ترکیب شده، بصورت غیر محلول در آمده و رسوب سیاه سولفید آهن را تشکیل داده که در طول خط رشد دیده می شود.

اگر ارگانیزم کشت داده شده متحرک نیز باشد، تمام لوله می تواند سیاه گردد. این سیاه شدن نشان دهنده واکنش مثبت H2Sاست و در صورتیکه محیط سیاه نگردد نشان دهنده منفی بودن H2Sمی باشد. SIM همچنین می تواند جهت مشخص کردن تحرک یا عدم تحرک و تولید اندول استفاده گردد. وقتی باکتری متحرک می باشد که رشد محدود به خط کشت داده شده نباشد در حالیکه باکتری فاقد تحرک فقط در محدوده خط کشت داده شده رشد می کند.

همچنین می توان از محیطهای نیمه جامد جهت نشان دادن تحرک باکتری استفاده کرد. باکتریهای متحرک در خلال رشد از خط کشت داده شده گسترش پیدا کرده و در اطراف آن کدورت ایجاد می گردد. باکتری غیر متحرک فقط در طول خط کشت داده شده رشد می کند.

پروتکل تست SIM

مرحله اول

1- هر لوله SIMرا با باکتری مورد نظر ، نام خود و تاریخ علامت گذاری کنید.
2- بصورت استریل هر لوله را با میزان مناسب باکتری با وارد کردن سوزن تا 3/4 ته لوله کشت دهید. همین کار را با سه عدد لوله حاوی تست حرکت انجام دهید.
3- محیطها را به مدت 48-24 ساعت در 35 درجه قرار دهید.

مرحله دوم

1- بررسی محیطهای SIMاز نظر وجود یا عدم وجود رسوب سیاه در طول خط کشت باکتری. رسوب سیاه FeS نشانگر حضور H2S می باشد.
2- نتایج خود در خصوص تحرک یا عدم تحرک و + H2Sیا – H2Sبودن هر باکتری را یادداشت کنید.
3- در صورت امکان با اضافه کردن 5 قطره معرف کواکس به محیط
SIM و مشاهده رنگ قرمز در سطح محیط می توان تولید اندول را بررسی کرد.

نکات لازم

1- مراقب باشید که موقع خارج کردن سوزن تلقیح بعد از تلقیح از داخل محیط تا حد امکان نزدیک به خط ورود باشد.
2- راه دیگر بررسی تحرک این است که لوله مورد نظر را به آرامی حول خط کشت بچرخانید. اگر رشد در دو طرف گسترده و در دو طرف دیگر در طول خط بود ، در این حالت غیر متحرک است.
3- جهت بررسی تحرک مطئن گردید که سطح خارجی لوله تمیز است.
4- هر میزان سیاه شدن محیط نشان دهنده مثبت بودن
H2Sمی باشد.

هیدرولیز چربی. (a) روش کشت نقطه ای بر روی پلیت . spirit blue agar
(b)
واکنش های مثبت و منفی

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و مولکولی یعنی انجام دادن تمام تکنیک ها توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051
021404436-7

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده، همچنین میتوانید درباره نکات کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی مطالعه کنید و اگر به این مبحث علاقمند هستید میتوانید از این لینک به زبان انگلیسی درباره آنزیم بتاگالاکتوزیداز مطالعه کنید.

همچنین این شرکت دانش بنیان تولید کننده انواع سیستم تصفیه آب صنعتی بر پایه بیوفیلتر میباشد.

سرتیترها

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

منوی دسته بندی های خود را در تنظیمات قالب -> هدر -> منو -> منو موبایل (دسته ها) تنظیم کنید
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
برای دیدن نوشته هایی که دنبال آن هستید تایپ کنید.
فروشگاه
لیست علاقه مندی ها
0 مورد سبد خرید
حساب من