پویاژن آزما

تست SIM

تست SIM
فهرست مطالب

تست SIM یکی از تکنیک های مهم در آزمایشگاه میکروبیولوژی است. در این مقاله شرکت پویاژن با روش انجام تست sim، تست sim باکتری و محیط کشت آشنا می شوید.

تعدادی از پروتئین ها غنی از اسیدهای آمینه دارای سولفور نظیر سیستئین می باشند. وقتی این پروتئین ها بوسیله باکتریها هیدرولیز می گردند، این اسیدهای آمینه آزاد شده و جذب باکتری می گردند. سیستئین در حضور سیستئین دسولفوراز از طریق اضافه شدن هیدروژن از آب به آن ، اتم سولفور خود را از دست داده و بصورت گاز سولفید هیدروژن آزاد می گردد. در این مقاله آزمایشگاه همکار غذا و دارو پویاژن آزما قصد دارد بطور مفصل به توضیح پروتکل تست SIM بپردازد.

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید، به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

تولید سولفید هیدروژن و تحرک (SIM)

  • کشت 24-48 ساعته از کلبسیلا پنمومونیا، پروتئوس ولگاریس و سالمونلا تیفی موریوم در محیط TSB
  • شعله
  • سوزن کشت
  • رک
  • 3 لوله حاوی 3 عدد محیط تست تحرک (SIM agar(sulfide-hndole-motility
  • معرف کواکس
  • انکوباتور تنظیم شده در 35 درجه
  • قلم مناسب

با انجام این تست شما این موارد را یاد میگیرید:

  1. درک فرایند بیوشیمیایی تولید سولفید هیدروژن بوسیله باکتری
  2. توصیف دو راه تشخیص تولید سولفید هیدروژن
  3. توصیف چگونگی تشخیص حرکت
  4. انجام مناسب آزمایش سولفید هیدروژن و حرکت

اصول تست SIM

گاز سولفید هیدروژن همچنین ممکن است بوسیله احیای سولفورهای غیر آلی نظیر تیوسولفات (S2O32)، سولفات (SO42) یا سولفیت (SO32) تولید گردد. به عنوان مثال وقتی باکتری معینی تیوسولفات سدیم را جذب کند، می تواند آن را با استفاده از آنزیم تیوسولفات ردوکتاز به سولفیت احیا کند و گاز سولفید هیدروژن آزاد گردد.

اصول تست SIMتولید سولفید هیدروژن. باید توجه داشت که تمام باکتریها H2Sمثبت و متحرک یا H2Sمنفی و غیر متحرک نیستند. ممکن است ترکیبی از این نتایج وجود داشته باشد.

در این آزمایش ، محیط SIM که دارای پپتون و تیوسولفات سدیم به عنوان سوبسترا و سولفات آمونیوم آهن Fe(NH4)SO4، به عنوان معرف H2S است استفاده می گردد. سیستئین یکی از اجزاء پپتون است که در این محیط استفاده شده است. از آگار جهت جامد شدن محیط استفاده شده است. وقتی H2Sتولید شد با سولفات آمونیوم آهن ترکیب شده، بصورت غیر محلول در آمده و رسوب سیاه سولفید آهن را تشکیل داده که در طول خط رشد دیده می شود.

اگر ارگانیزم کشت داده شده متحرک نیز باشد، تمام لوله می تواند سیاه گردد. این سیاه شدن نشان دهنده واکنش مثبت H2Sاست و در صورتیکه محیط سیاه نگردد نشان دهنده منفی بودن H2Sمی باشد. SIM همچنین می تواند جهت مشخص کردن تحرک یا عدم تحرک و تولید اندول استفاده گردد. وقتی باکتری متحرک می باشد که رشد محدود به خط کشت داده شده نباشد در حالیکه باکتری فاقد تحرک فقط در محدوده خط کشت داده شده رشد می کند.

همچنین می توان از محیطهای نیمه جامد جهت نشان دادن تحرک باکتری استفاده کرد. باکتریهای متحرک در خلال رشد از خط کشت داده شده گسترش پیدا کرده و در اطراف آن کدورت ایجاد می گردد. باکتری غیر متحرک فقط در طول خط کشت داده شده رشد می کند.

روش انجام تست sim

مرحله اول – آماده سازی محیط کشت sim

  1. هر لوله SIM را با باکتری مورد نظر، نام خود و تاریخ علامت گذاری کنید.
  2. بصورت استریل هر لوله را با میزان مناسب باکتری با وارد کردن سوزن تا 3/4 ته لوله کشت دهید. همین کار را با سه عدد لوله حاوی تست حرکت انجام دهید.
  3. محیطها را به مدت 48-24 ساعت در 35 درجه قرار دهید.

مرحله دوم – بررسی محیط sim

  1. بررسی محیطهای SIMاز نظر وجود یا عدم وجود رسوب سیاه در طول خط کشت باکتری. رسوب سیاه FeS نشانگر حضور H2S می باشد.
  2. نتایج خود در خصوص تحرک یا عدم تحرک و + H2Sیا – H2Sبودن هر باکتری را یادداشت کنید.
  3. در صورت امکان با اضافه کردن 5 قطره معرف کواکس به محیط SIM و مشاهده رنگ قرمز در سطح محیط می توان تولید اندول را بررسی کرد.

نکات لازم

  1. مراقب باشید که موقع خارج کردن سوزن تلقیح بعد از تلقیح از داخل محیط تا حد امکان نزدیک به خط ورود باشد.
  2. راه دیگر بررسی تحرک این است که لوله مورد نظر را به آرامی حول خط کشت بچرخانید. اگر رشد در دو طرف گسترده و در دو طرف دیگر در طول خط بود ، در این حالت غیر متحرک است.
  3. جهت بررسی تحرک مطئن گردید که سطح خارجی لوله تمیز است.
  4. هر میزان سیاه شدن محیط نشان دهنده مثبت بودن H2Sمی باشد.

نکات لازم تست SIM

هیدرولیز چربی. (a) روش کشت نقطه ای بر روی پلیت . spirit blue agar
(b) واکنش های مثبت و منفی

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و کارآموزی مهندسی ژنتیک یعنی انجام دادن تمام تکنیک های میکروبی و مولکولی توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده، همچنین میتوانید درباره نکات کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی مطالعه کنید و اگر به این مبحث علاقمند هستید میتوانید از این لینک به Sulfur Reduction Test- Principle, Procedure, Results, Uses (زبان انگلیسی)  زبان انگلیسی درباره آنزیم بتاگالاکتوزیداز مطالعه کنید.

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

بهاره حسینی
کارشناس بیوتکنولوژی از دانشگاه خوارزمی
تخصص در بیوانفورماتیک و میکروب شناسی محیطی

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه