11

اصول SDS page

SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis) یک سیستم الکتروفورزی نامداوم هست که توسط Ulrich K. Laemmli اختراع شد. این سیستم به عنوان روشی رایج برای جداسازی پروتئین هایی با وزن مولکولی بین 5 تا 250 کیلو دالتون استفاده می شود. استفاده ترکیبی از دو ماده SDS و polyacrylamide gel باعث خنثی شدن تاثیرات ساختار و بار می شود؛ در نتیجه، پروتئین ها فقط براساس وزن مولکولی خود جدا می شوند.

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051

02140443676

تاریخچه

در سال 1948 آرن تیسلیوس برای کشف قوانین الکتروفورز (در حرکت اتم ها و مولکول های بار دار در الکتروفورز) جایزه ی نوبل دریافت کرد. بعد از این کشف، از ماتریکس جامد (ابتدا دیسک کاغذی) در محیط الکتروفورزی استفاده شد که جداسازی را بهبود داد. الکتروفورز نا مداوم در سال 1964 جداسازی با اثر انبوه سازی، جداسازی را بهبود داد. استفاده از هیدروژل پلی آکریلامید کراس لینک برخلاف استفاده های قبلی از دیسک های کاغذی یا ژل های نشاسته ای، ثبات بالای ژل، بدون تجزیه ی میکروبی را فراهم می کند. نوع کنونی SDS-PAGE در 1970 توسط Ulrich K. Laemmli شرح داده شد. در ابتدا این روش برای مشخص کردن پروتئین های سر باکتروفاژ T4 استفاده شد.

کاربرد های SDS-page

بخش اعظم این روش از دهه ی 70 میلادی که معرفی شد بدون تغییر باقی ماند. این روش در مواردی که نیاز به حفظ ساختار یا عملکرد طبیعی پروتئین ندارند به خوبی عمل می کند. پس از این روش در خالص سازی پروتئین ها ، ارزیابی بیان پروتئین ها، شناسایی ایمونوکمیکال و تعداد پروتئین ها (وسترن بلات) می توان استفاده نمود.

به علت محدودیت در حفظ ساختار پروتئین ها از این روش نمی توان در فعالیت های آنزیمی، واکنش های پروتئین باندینگ، تعیین کوفاکتور های پروتئین و غیره استفاده کرد. پس در این موارد باید از روش های دیگری مانند blue-native PAGE  بهره برد.

ژل SDS page

در وسط ژل، باز پلی آکریلامید قرار دارد که به عنوان ماتریکس نیز شناخته می شود. ژل پلی آکریلامید از واکنش آکریلامید و بیس آکریلامید(N,N’-methylenebisacrylamide) با کراس لینک قوی در ژل ماتریکس شکل می گیرند. این ژل معمولا به حالت ساندویچی در بین دو پلیت شیشه ای قرار میگیرد. با اینکه ژل های لوله ای (سیلندر های شیشه ای) به صورت افقی استفاده می شدند به سرعت با اختراع slab ژل های مناسب بیشتر و استفاده از SDS پربازده تر شدند.

SDS

حدود 1.4 گرم از SDS با یک گرم از پروتئین پیوند تشکیل می دهد؛ در واقع هر مولکول SDS با دو امینو اسید پیوند ایجاد می کند. SDS  به عنوان یک سورفاکتانت عمل می کند به طوری که بار طبیعی پروتئین را می پوشاند و بار آن ها را بسیار مشابه بار نسبت های جرمی میکند. بار طبیعی پروتئین در مقابل SDS بسیار ناچیز است و هم چنین بار های مثبت در بازه ی اصلی pH ژل جداکننده به طور چشم گیری کاهش می یابد. در طی انجام آزمایش که سطح به طور مداوم دارای الکتریسیته هست هر پروتئین با سرعت متفاوتی متناسب با وزن خود به سمت انود می رود. این پروسه ی ساده اجازه ی جداسازی دقیق پروتئین ها را به ما می دهد.

SDS در محلول های آبی بالا تر از یک حد مشخص غلظت تمایل دارد به شکل میسل های کروی دربیاید به این غلظت critical micellar concentration (CMC) گفته می شود 7 تا 10 میلی مولار بالاتر از CMC در محلول ها همگی مولکول های SDS به صورت تک مولکولی (مونومر) و به عنوان میسل در می آید.

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

توجه داشته باشید که در حالت طبیعی SDS آمفیپاتیک است و می تواند هر دو قسمت قطبی و غیر قطبی ساختار پروتئین را unfold کند؛ هم چنین فقط مونومر های SDS به پروتئین با واکنش هیدروفوبیک متصل می شوند؛ این درحالی است که سطح بیرونی میسل های  SDS آنیونیک هستند و پروتئین دیگری را جذب نمی کند.

در SDS غلظت بالای 0.1 میلی مولار باز شدن پروتئین ها رخ می دهد و بالای 1 میلی مولار بیشتر پروتئین ها دناتوره شده اند. به علت تاثیر شدید SDS وگسستگی متعاقب ساختارهای چهارم به طور معمول با SDS قابل شناسایی نیستند. استثنا پروتئین هایی هستند که با پیوند کراس کووالانت مانند پیوند های -S-S- و کمپلکس پروتئینی به SDS مقاوم هستند (که حتی در حضور SDS نیز ثابت هستند) (البته فقط در دمای اتاق). برای دناتوره کردن کمپلکس های مقاوم SDS، انرژی فعال سازی بالایی لازم است که با گرم کردن به دست می آید.

SDS-page

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

اصول کار SDS-PAGE

این پروسه با دناتوره کردن پروتئین ها با یک شوینده ی آنیونی شروع می شود که به آنها متصل می شود و بار منفی به آنان میدهد. در مرحله ی بعدی جداسازی پروتئین ها توسط ماتریکس ژل آکریلامید حفره دار با کیفیت بالا انجام می شود.

مولکول های باردار زمانی که در محیط الکتریک قرار می گیرند به سمت الکترود با بار مخالف حرکت میکنند. جداسازی مولکول های باردار به تحرک گونه های باردار بستگی دارد. هرچه مولکول ها کوچکتر باشند به علت کاهش مقاومت در حین الکتروفورز سریع تر حرکت می کنند. هم چنین ساختار و بار پروتئین ها در سرعت حرکت تاثیر می گذارند. سدیم دودسیل سولفات و پلی آکریلامید اثر ساختار و بار را حذف می کنند در نتیجه پروتئین ها براساس طول زنجیره پلی پپتیدی جدا می شوند.

SDS-page

نقش SDS در SDS-PAGE

SDS شوینده ای در بافر SDS-PAGE است که به کمک عوامل کاهنده پیوند های دی سولفیدی را می شکند و ساختار سوم پروتئین را مختل می کند.

 

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و مولکولی یعنی انجام دادن تمام تکنیک ها توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051
021404436-7

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده، همچنین میتوانید درباره انتخاب آنزیم DNA پلیمراز مناسب مطالعه کنید.
در ادامه، پروتکل و روش SDS-page  را میتوانید از این لینک در سایت پویا ژن آزما مطالعه کنید.

و اگر به این مبحث علاقمند هستید میتوانید از این لینک به زبان انگلیسی درباره آن مطالعه کنید.

همچنین این شرکت دانش بنیان تولید کننده انواع سیستم تصفیه آب صنعتی بر پایه بیوفیلتر میباشد.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

منوی دسته بندی های خود را در تنظیمات قالب -> هدر -> منو -> منو موبایل (دسته ها) تنظیم کنید
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
برای دیدن نوشته هایی که دنبال آن هستید تایپ کنید.
فروشگاه
لیست علاقه مندی ها
0 مورد سبد خرید
حساب من