روش تهيه كشت خالص باکتری ها

روش تهيه كشت خالص باکتری ها
فهرست مطالب

کشت باکتری

برای کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی باید انواع کشت باکتری را بتوانید به خوبی و بدون آلودگی انجام دهید. در این مطلب به روش تهیه کشت خالص باکتری ها، کشت خطی باکتری و کشت سفره ای می پردازیم.

در مقالات قبل درباره نکاتی که باید برای کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی بدانید و تمامی وسایل و دستگاه های مورد استفاده توضیح داده شد. همچنین میتوانید درباره انواع محیط کشت میکروب و نحوه جداسازی میکروارگانیسم ها از محیط های مختلف مطالعه کنید.

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و کارآموزی مهندسی ژنتیک یعنی انجام دادن تمام تکنیک های میکروبی و مولکولی توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

کیت استخراج DNA از باکتری تولیدی پویا ژن آزما از سخت ترین نمونه های باکتری مانند استافیلوکوکوس اورئوس با کیفیت بالا استخراج کرده و نتایج PCR و تعیین سکانس عالی خواهید داشت. با به صرفه ترین قیمت و بیشترین کیفیت.

روش تهیه کشت خالص باکتری ها

به منظور مطالعات اختصاصی روی باکتری ها از کشت خالص یک باکتری خاص باید استفاده کرد. هر کشت خالص بعنوان مثال حاوی سویه خاص ایزوله شده از بین مخلوطی ازباکتری های مختلف می باشد وبه این ترتیب ، بررسی خواص مورفولوژیک و بیوشیمیایی آن مقدور میگردد.

کلنی ها توده های منفرد وقابل رؤیت (بدون نیاز به چشم مسلح) رشد میکروبی در سطح محیط جامد است که هر کدام ناشی از تکثیر یک موجود زنده منفرد می باشد. بعد از تخلیه کلنی مجزا، به کمک انتقال آسپتیک می توان بمنظور ایزولاسیون کشت های خالص آن ها را به محیط نوترینت آگار لوله کج انتقال داد.

جداسازی کلنی های مجزا از یک محیط کشت باکتری مخلوط

هدف خالص سازی باکتری ها

انجام روش تلقیح خطی یا سفره ای روی پلیت آگاردار بمنظور جداسازی یک کشت مخلوط بطوریکه بتوان کلنی های مجزا را ایزوله کرد.

اصول کلی خالص سازی و کشت باکتری ها

روش هایی که عموماً به منظور ایزولاسیون کلنی های مجزا ازهم بکار می روند، ابتدا نیازدارند که میکروارگانیسم های موجود در تلقیح کم باشد. به این ترتیب این اطمینان حاصل میشود که سلول های مورد نظر به حد کافی از هم دور هستند که درصورت تشکیل کلنی، با هم مخلوط نشوند.

روش کشت خطی باکتری (streek- plate)

دراین روش یک لوپ از کلنی های رشد کرده بر روی محیط های کشت داده شده که روش تهیه آن را در مقاله قبل توضیح دادیم، در سطح پلیت آگار بطور خطی کشت داده می شود با وجودیکه روش های متعددی از کشت خطی وجود دارد، دراینجا ازروش یک چهارم استفاده میشود.

  1. ابتدا از کلنی های رشد کرده بر روی محیط های کشت داده شده در هفتة قبل، یک کلنی بوسیله لوپ استریل برداشت کرده، مطابق شکل زیر آنرا روی سطح آگار دار درمنطقه 1 قرارداده ،کشتی متراکم ایجاد کنید. سپس لوپ را حرارت داده تا استریل شود. لوپ را با وارد کردن آن دربخشی ازمحیط کشت باکتری که فاقد میکروب است، سردکنید. بلافاصله آنرا چند بار و به طور سریع در منطقه 1 بصورت عرضی بکشید.
  2. دوباره لوپ را حرارت داده و سرد کنید. پلیت رابه اندازه 90 درجه چرخانده، سپس لوپ را درمحلی، درتماس با منطقه 1 قرار داده، و سپس آنرا چند بار در عرض منطقه 2 بکشید. دقت کنید که لوپ را فقط یکبار در ابتدای کار وارد منطقه 1 کنید.
  3. لوپ راحرارت داده وسرد کنید . پلیت را به اندازه 90 درجه چرخانده وکشت باکتری را در یک گوشه منطقه 2 به منطقه 3 بکشید.
  4. این عمل را برای منطقه 4 نیز تکرار کرده وکشت منطقه 3 را به منطقه 4 بکشید . توجه داشته باشید در هیچکدام از مراحل، این خطوط با نواحی کشت داده شده قبلی تماس نیابند.
    دراثر حرارت دادن آنس در هر یک از مراحل از تعداد باکتری ها درهر منطقه کاسته می شود. در نتیجه در منطقه 4 می توان کلنی های مجزایی را بد ست آورد که با فاصله مناسب از همدیگر قرار گرفته اند .
کشت باکتری

روش کشت خطی باکتری بر روی پلیت

اگر مایلید تست های میکروبی و مهندسی ژنتیک را آموزش ببینید و خودتان انجام دهید، به صفحه کارآموزی مهندسی ژنتیک و کارآموزی میکروبیولوژی سر بزنید یا با ما تماس بگیرید.

09101438051 / 02140443676

روش کشت سفره ای ( spread plate )

دراین روش کشت باکتری یک مخلوط رقیق شده از باکتری استفاده می شود. برای کشت دادن سلول ها درتمام سطح محیط جامد از میله ای شیشه ای L شکل استفاده می شود.

  1. دراین حالت، ابتدا میله L شکل را در داخل یک بشر شیشه ای قرار دهید وبه آن میزان مناسبی اتانل %95 اضافه کنید تا الکل روی قسمت خمیده را کاملا بگیرد.
  2. بااستفاده ازلوپ استریل، کشت باکتری مورد نظررابرداشته وآن را در مرکز پلیت حاوی نوترینت آگار قراردهید.
  3. به کمک میله L شکل استریل شده روی شعله، ماده تلقیح شده را درسرتاسر محیط آگار بگسترانید.
  4. میله شیشه ای رادر معرض الکل وحرارت قراردهید .
    پلیت ها را مدت 48 ساعت در گرمخانه قرار دهید و سپس نتایج را طبق شکل بررسی کنید.

خصوصیات کشت در محیط نوترینت براث

جهت بررسی خصوصیات کشت باکتری در محیط مایع، یک کلنی از نمونه های رشد کرده بر روی پلیت های جلسه گذشته را با آنس استریل برداشت کرده و در 5 میلی لیتر محیط نوترینت براث بصورت سوسپانسیون در آورده و لوله ها را مدت 48 ساعت در گرمخانه قرار دهید و سپس خصوصیات کشت ها را بصورت زیر و مطابق شکل زیر بررسی کنید:

  1. کدورت یکنواخت : تمام قسمتهای محیط کشت کدورت گرفته است (a).
  2. لخته ای ( flocculate) : رشد بصورت تکه تکه و لخته مانند درمحیط دیده می شود (e)
  3. رشد غشایی (pellicle ) : در سطح محیط یک پوسته غشایی نازک شناور دیده می شود (b,d)
  4. رسوب (sediment ) :باکتری درته لوله رشد کرده، قیافه ای دانه دار،غشایی یا لخته ای به خود می گیرد(c) .
کشت خطی باکتری

     خصوصیات کشت در محیط مایع نوترینت 

 

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده و انواع کشت باکتری را یاد گرفته باشید. میتوانید نحوه مشاهده میکروارگانیسم ها زیر میکروسکوپ را نیز مطالعه کنید.

 

شرکت پویا ژن آزما با استفاده از تجربه و تخصص در حوزه­ تحقیق و تولید فراورده ­های بیوتکنولوژی موفق به تولید انواع سیستم های تصفیه فاضلاب های صنعتی بر اساس بیوفیلتر شده است که قادر است این فاضلاب ها را تا میزان استانداردهای سازمان حفاظت محیط زیست تصفیه کرده و آب حاصل مجددا مورد استفاده قرار گیرد.

شماره تماس: 02140443676 – 09101438051

برای کارآموزی مولکولی و میکروبی، خرید انواع کیت (پلاسمید، DNA، از ژل) و خدمات آزمایشگاهی با ما تماس بگیرید.

نویسندگان این محتوا در پویاژن آزما

دکتر مجید مقبلی
دکتری میکروبیولوژی از دانشگاه تهران
هیئت علمی دانشگاه
متخصص در زمینه مهندسی ژنتیک، تولید واکسن های نوترکیب و مخترع بیوفیلترهای صنعتی

فاطمه مقبلی
کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران
تخصص در بخش درمان های نوین سرطان و مهندسی ژنتیک

سپیده ایمانی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی ملکولی از دانشگاه صنعتی مالک اشتر
تخصص در مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

این سایت توسط reCAPTCHA و گوگل محافظت می‌شود حریم خصوصی و شرایط استفاده از خدمات اعمال.

The reCAPTCHA verification period has expired. Please reload the page.

منوی دسته های خود را در هدرساز -> موبایل -> منوی اصلی موبایل -> نمایش/مخفی -> انتخاب منو، تنظیم کنید.
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
خانه
فروشگاه