پلاسمیدها قطعه های کوچکی از DNA حلقوی هستند که در سلول های باکتریایی یافت می شوند. معمولا پلاسمیدها دارای ژن های خاصی هستند که به بقای باکتری در محیط کمک می کند؛ مانند ژن های تولید کننده آنتی بیوتیک یا ژن مقاومت به یک آنتی بیوتیک خاص. پلاسمیدها معمولا از طریق انتقال افقی قابل انتقال به یکدیگر هستند.
در علم بیوتکنولوژی از روش های مختلفی برای جداسازی پلاسمید استفاده می شود. از این روش ها می توان به روش اتیدیوم بروماید سزیم کلراید، جوشاندن و روش های قلیایی اشاره کرد. می توان از روش های به اصطلاح دستی برای استخراج پلاسمید استفاده کرد. اما می توان از انواع کیت های مختلف تجاری برای این کار استفاده کرد که توسط محققان بهینه سازی شده و به راحتی قابل استفاده است.
شرکت دانش بنیان پویاژن آزما به تکیه بر دانش روز و با کمک تجربه متخصصان خود موفق به ساخت انواع کیت های ملکولی جهت استخراج DNA شده است که کیت استخراج پلاسمید نیز یکی از این محصولات محسوب می شود. در ادامه این مقاله روش کار با این کیت را به سادگی برای شما توضیح دادیم تا به راحتی بتوانید پلاسمیدی با کیفیت بالا و خلوص عالی به دست آورید.
برای جداسازی انواع DNA و باکتری می توانید از کیت های پویاژن آزما تهیه کنید. برای خرید کیت استخراج پلاسمید کلیک کنید.
همچنین شما میتوانید در دوره های کارآموزی پویاژن آزما شرکت کنید تا پس از آموزش، تمامی تکنیک های مهندسی ژنتیک را خودتان انجام دهید. برای اطلاعات بیشتر و ثبت نام کلیک کنید.
استخراج پلاسمید
کیت استخراج پلاسمید پویاژن آزما به صورتی بهینه سازی شده که تا غلظت µg30 پلاسمید با کیفیت بالا از کشت باکتری 1-5 میلی لیتری در کمتر از 30 دقیقه جدا سازی شود. این کیت با استفاده از تکنیک میکروستونی بهینه سازی شده است. DNA پلاسمیدی استخراج شده می تواند بلافاصله برای آزمایش های بعدی همچون مشاهده و بررسی ، هضم آنزیمی و توالی یابی استفاده شود.
مزایای کیت استخراج پلاسمید پویاژن آزما
- جداسازی با استفاده از ستون
- زمان بری پایین
- محصول پایدار
- بدون نیاز به اضافه کردن مواد اضافه
- کیفیت بالای DNA استخراجی و غلظت تا µg 30
- آماده استفاده به منظور توالی یابی فلورسنت، کلونینگ، هیبریداسیون و الکتروپوریشن
روش کار استخراج پلاسمید
1. 1 الی ml5 (پلاسمید High copy number)، و بیش از ml10 (پلاسمید Low copy number) از کشت باکتری overnight را بردارید.
2. 3 دقیقه با دور 13000 سانتریفیوژ کنید. رسوب را نگه دارید و سوپرناتانت را دور بریزید.
3. l200µ بافر R (مخلوط شده با RNase A) را به رسوب افزوده و با پیپتاژ رسوب را درون بافر کاملا حل کنید.
4. l250µ بافر L را افزوده، بلافاصله با 4-6 بار اینورت کردن مخلوط کنید.
5. L350µ بافر N را افزوده، با 4-6 بار اینورت کردن مخلوط کنید. وقتی خنثی سازی کامل شود، رسوب مشاهده می گردد. لایزت را به مدت 2 دقیقه در دمای اتاق نگه داری کنید.
6. 10 دقیقه با دور 13000 سانتریفیوژ کنید. سوپرناتانت را به به ستون اضافه کنید.
7. 1 دقیقه با دور 13000 سانتریفیوژ کنید. مایع زیرین را دور بریزید.
8. L500µ بافر EW را به ستون بیافزایید؛ به مدت 1 دقیقه با دور 13000 سانتریفیوژ کنید. مایع زیرین را دور بریزید.(اختیاری: اگر سویه میزبان شما endA+ است، با این مرحله شست شوی اضافی اندونوکلئاز به خوبی حذف می شود.)
9. L500µ بافر W را به ستون افزوده، (در اولین استفاده اطمینان حاصل کنید که الکل را افزودید) به مدت 1 دقیقه با دور 13000 سانتریفیوژ کنید. مایع زیرین را دور بریزید.
10. برای اطمینان از خروج کامل بافر EW، 1 دقیقه اضافه ستون خالی را با دور 13000 سانتریفیوژ کنید.
11. ستون را به تیوب جدید انتقال دهید؛ l30-100µ از بافر EB یا آب مقطر دو بار تقطیر را مستقیما به وسط فیلتر میکروستون بیافزایید. به مدت 1-2 دقیقه ستون را در دمای اتاق نگه داری کنید. سپس به مدت 1 دقیقه با دور 12000 سانتریفیوژ کنید. محلول به دست آمده پلاسمید تخلیص شده است. این محلول آماده استفاده یا نگه داری در فریزر C˚20- است.
برای جداسازی انواع DNA و باکتری می توانید از کیت های پویاژن آزما تهیه کنید. برای خرید کیت استخراج پلاسمید کلیک کنید.
برای مطالعه بیشتر در این زمینه می توانید به این لینک مراجعه کنید.
