باکتری های بی هوازی

پروتکل کشت باکتری های بی هوازی

از نظر آزمایشگاه تشخیص پزشکی، اصلی ترین باکتری های بی هوازی بیماریزا بر اساس محل آنها در بدن متفاوتند. در مقاله قبل درباره روش های کشت بی هوازی باکتری ها صحبت کردیم. در این مقاله شرکت دانش بنیان پویاژن آزما و آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو قصد دارد بطور مفصل روش های کشت باکتری های بی هوازی را بررسی کند.

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و کارآموزی مهندسی ژنتیک یعنی انجام دادن تمام تکنیک های میکروبی و مولکولی توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید. 

09101438051
021404436-7

کیت استخراج DNA از باکتری تولیدی پویا ژن آزما از سخت ترین نمونه های باکتری مانند استافیلوکوکوس اورئوس با کیفیت بالا استخراج کرده و نتایج PCR و تعیین سکانس عالی خواهید داشت. با به صرفه ترین قیمت و بیشترین کیفیت.

رابطه O2 و رشد باکتری

1- سه عدد لوله حاوی Eugon agar deep را ذوب کرده و چند دقیقه حرارت داده تا اکسیژن کاملا زدوده گردد.
2- لوله ها را در حمام آب گرم 58-50 درجه سرد کنید.
3- با قلم مناسب، هر لوله را با نام باکتری که تلقیح می گردد، نام خودتان و تاریخ را یادداشت کنید.
4- بطور استریل هر لوله سرد شده را با یک یا دو لوپ پر از یک باکتری (سودوموناس آئروژینوزا، کلستریدیوم اسپوروژنز و
E. coli) تلقیح کنید.
5- باکتریها را بدون هوا دادن از طریق قرار دادن در بین دو کف دست و چرخاندن، در داخل محیط مخلوط کنید.
7- اجازه دهید آگار سفت شده و سپس سه لوله را در 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید.
8- هر لوله را از لحاظ رشد بررسی کرده و نتایج را یادداشت کنید.

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

کشت مایع باکتری های بی هوازی

1- سه لوله حاوی محیط مایع تیوگلیکولات حرارت داده شده را با نام باکتری، نام خودتان و تاریخ علامت گذاری کنید.
2- بصورت استریل هر لوله را با یک باکتری تلقیح کنید. جهت جلوگیری از اکسیده شدن محیط، آنها را هم نزنید. متیلن بلو یا
resazurin به عنوان نشانگر اکسیداسیون-احیا در محیط وجود دارد. اگر بیش از 1/3 محیط آبی یا قرمز شده باشد، لوله باید در حمام آب گرم مجددا حرارت داده شود تا اکسیژن حذف گردد.

3- لوله ها به مدت 24-48 ساعت در 35 درجه قرار داده شود.
3- هر لوله را از لحاظ رشد بررسی کرده و نتایج را یادداشت کنید.

کشت باکتری های بی هوازی بر روی پلیت

1- یک پلیت تریپتیک سوی آگار ، یک پلیت آگار بی هوازی برور و یک پلیت برور با پوشش آماده کنید. با استفاده از قلم پشت هر پلیت را دوقسمت کرده، در یک قسمت نام سودوموناس آئروژینوزا و در قسمت
دیگر نام کلستریدیوم اسپوروژنز را یادداشت کنید. 3 عدد پلیت مشابه قبلی را با سودوموناس آئروژینوزا و
E. coliعلامت گذاری کنید. این 3 پلیت رشد بی هوازی اختیاری را نشان می دهند.
2- با استفاده از لوپ تلقیح، مرکز هر قسمت را با باکتری مشخص شده کشت دهید.
3- پلیت تریپتیک سوی آگار را در 00درجه در شرایط هوازی معمولی قرار دهید.
4- با احتیاط پلیت برور را با پوشش مخصوص برور استریل بپوشانید. دیواره حلقوی پوشش باید تا سطح آگار فشار داده شود ولی داخل آگار نشود. سپس در 35 درجه قرار داده شود.
5- پلیت بی هوازی را در جار بی هوازی یا در کیسه بی هوازی قرار دهید.
6- تمام نمونه ها مدت 24-48 ساعت در 35 درجه نگهداری و سپس نتایج یادداشت گردد.

سیستم گازپک

سیستم گازپک

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

کشت باکتری های بی هوازی بر روی سطح شیبدار لوله رایت (Wright)

1- دو لوله حاوی محیط تریپتیک سوی آگار بصورت شیبدار را با سودوموناس آئروژینوزا و دو لوله دیگر را با کلستریدیوم اسپروژنز نام گذاری کنید.
2- هر لوله را با باکتری مربوطه بصورت استریل تلقیح کنید.
3- دو لوله (یک لوله از هر باکتری) را در بطور هوازی 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید.
4- در دو لوله دیگر یک تکه پنبه را با ته لوپ تا تقریبا تماس با سطح آگار داخل کنید. در حالیکه دستکش در دست دارید، سطح بالای پنبه را با کریستالهای پیروگالول پر کرده و 1
ml از %10 NaOH به آن اضافه کنید.سریع درب لوله را با درپوش پلاستیکی بسته و آن را بر عکس کنید.

5- لوله ها را در داخل جالوله ای قرار داده و در 35 درجه به مدت 24-48 ساعت قرار دهید. سپس نتایج را یادداشت کنید.

جداسازی بی هوازی ها از خاک

1- یک اسپاتول از خاک در درون لوله حاوی محیط کشت مایع تیوگلیکولات بریزید.
2- به مدت یک روز در 30 یا 37 درجه قرار دهید.
3- محیط را جهت رشد باکتری از لحاظ ایجاد کدورت و تولید گازهای تخمیر بررسی کنید.
4- اگر زمان اجازه می دهد از محیط رشد کرده بر روی پلیت دارای آگار بی هوازی برور کشت داده و در انکوباتور گازپک قرار دهید. سپس مورفولوژی کلنی ها را بررسی و نتایج را یادداشت کنید.

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

روش ساده جهت رشد بی هوازی ها

1- بصورت استریل محیط کشت مایع تریپتیکیس سوی دارای اکسیراز مخصوص مایع و OxyDishدارای تریپتیکیس سوی آگار دارای اکسیراز مخصوص آگار را با سودوموناس آئروژینوزا، کلستریدیوم اسپروژنز و E. coli تلقیح کنید.
2- نمونه را در 37درجه به مدت 24-48 ساعت قرار داده و سپس نتایج را یادداشت کنید.

تذکرات و نکات ایمنی

1- اگر لوله درپیچ دار با هر محیط کشت (نظیر محیط مایع تیوگلیکولات) استفاده می گردد، درب آنها باید محکم بسته شده تا در هنگام قرار دادن در انکوباتور هوازی از نفوذ اکسیژن اتمسفری جلوگیری گردد.
2- در جار گازپک بی هوازی، در پوش نباید محکم بسته شود تا اکسیژن باقی مانده در لوله ها بوسیله گاز هیدروژن تولیدی در سیستم خنثی گردد.

برای آموزش های حضوری و کارآموزی میکروبیولوژی و مولکولی یعنی انجام دادن تمام تکنیک ها توسط خودتان میتوانید با ما تماس بگیرید.

09101438051
021404436-7

برای خرید کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی کلیک کنید.

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده، همچنین میتوانید درباره نکات کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی مطالعه کنید و اگر به این مبحث علاقمند هستید میتوانید از این لینک به زبان انگلیسی مطالعه کنید.

همچنین این شرکت دانش بنیان تولید کننده انواع سیستم تصفیه آب صنعتی بر پایه بیوفیلتر میباشد.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

منوی دسته بندی های خود را در تنظیمات قالب -> هدر -> منو -> منو موبایل (دسته ها) تنظیم کنید
اولین منوی خود را اینجا ایجاد کنید
سبد خرید
برای دیدن نوشته هایی که دنبال آن هستید تایپ کنید.
فروشگاه
لیست علاقه مندی ها
0 مورد سبد خرید
حساب من