خرید کیت استخراج DNA از بافت و کشت سلول پویاژن آزما
استخراج از ژنوم بافت ها و سلول های یوکاریوتی با هدف های متفاوتی انجام می شوند که به خاطر تفاوت ساختاری سلول های گیاهی و جانوری با باکتری ها باید از کیت استخراج مخصوص خودشان استفاده کرد.
کاربردهای کیت استخراج ژنوم از بافت و کشت سلول پویاژن آزما
استخراج ژنوم از نمونه های بافت و کشت سلول با اهداف مختلفی در آزمایشگاه ها انجام می شود. DNA استخراج شده با این کیت را می توان به منظور انجام آزمایشاتی مثل PCR، هضم آنزیمی، کلونینگ، ساترن بلات و توالی یابی DNA مورد استفاده قرار داد. همچنین میتوانید از پر پرندگان برای اهداف مختلف از جمله تعیین جنسیت پرنده، استفاده کنید.
مزایای کیت استخراج DNA از بافت و کشت سلول پویاژن آزما
بازدهی کیت بهینه سازی و تضمین شده است؛ به صورتی که شما با داشتن مقدار کمی نمونه (10-20 نانوگرم از بافت یا 200-500 میکرولیتر از نمونه پاپ اسمیر و یا 3×10^6 کشت سلولی)
زمان مورد نیاز برای رسیدن به نتیجه بسیار کوتاه است.
نیاز به استفاده از ستون ندارد و از همین جهت بسیار مقرون به صرفه می باشد.
مواد خطرناکی مثل فنول یا کلروفورم در آن به کار نرفته است.
روش استخراج DNA از بافت و سلول
توجه: قبل از شروع به کار RNase A موجود در کیت را به بافر MI افزوده و آن را درون یخچال نگه داری کنید.
قبل از شروع آزمون لطفا:
حمام آب 55 درجه سانتی گراد آماده کنید.
- با توجه به مقدار نمونه مورد آزمایش بافر آماده استفاده MI را تهیه کنید: مقدار 200 lµ از بافر MI را که از قبل با RNase A مخلوط شده، با 2 lµ پروتئیناز K به ازای هر نمونه مخلوط کنید.
- 200 lµ از بافر MI آماده استفاده را برای محلول کردن رسوب یا نمونه بافت اضافه کنید. به خوبی مخلوط کرده و به مدت 30 تا 50 دقیقه در دمای 55 درجه انکوبه کنید.
- 50 lµ بافر MII به تیوب اضافه کرده و 2 بار به آرامی اینورت کنید. به مدت 5 تا 10 دقیقه در دمای محیط بگذارید تا یک محلول شفاف و بی رنگ به دست بیاید.
- 1 lµ RNase A را به لایزت اضافه کنید، با 5 بار پیپتاژ کنید تا محلول همگنی به دست بیاید. سپس به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق نگه داری کنید.
- 100 lµ بافر MIII به تیوب اضافه کرده و 10 بار اینورت کنید. (وقتی که این بافر اضافه می شود، یک رسوب سفید رنگ مشاهده خواهد شد).
- به مدت 10 دقیقه با دور 13000 میکروفیوژ کنید.
- سوپرناتانت را به تیوب جدیدی منتقل کنید. (توجه: هنگام انتقال سوپرناتانت مراقب باشید تا هیچگونه رسوبی به تیوب جدید منتقل نشود؛ اگر شد مرحله 5 و 6 را تکرار کنید).
- مقدار دو برابر سوپرناتانت الکل 96% به تیوب اضافه کنید و 5 بار به آرامی اینورت کنید.
- به مدت 5 دقیقه با دور 13000 میکروفیوژ کنید.
- اتانول را از تیوب خارج کرده و رسوب را نگه دارید.
- رسوب را با 700 lµ اتانول 70% شست و شو دهید و 2-3 بار اینورت کنید.
- به مدت 1 دقیقه با دور 13000 میکروفیوژ کنید.
- اتانول را کاملا تخلیه کرده و و تیوب را به مدت چند 2-3 دقیقه در دمای محیط بگذارید تا الکل کاملا تبخیر شود.
با توجه به میزان رسوبی که مشاهده می کنید مقداری بین 20 تا 50 lµ بافر محلول کننده اضافه کنید. رسوب باید درون بافر محلول کننده کاملا حل شود.