آموزش رایگان, تکنیک های پر کاربرد مولکولی, تکنیک های مولکولی

آموزش استخراج DNA از قارچ و مخمر

آموزش استخراج DNA از قارچ

در این مقاله از پویاژن می خواهیم به سراغ آموزش استخراج DNA از قارچ و مخمر برویم

برای استخراج DNA از قارچ و مخمر بهترین راه رو براتون اپتیمایز کردیم و داخل این فیلم با تمام نکاتی که لازم دارید تا به هر روشی استخراج کنید آوردیم. این نکات رو توی هیچ کتابی پیدا نمیکنید و همشون تجربی بدست اومده که تیم ما رایگان در اختیارتون گذاشته.

برای انجام بسیاری از آزمایشات مولکولی شما به استخراج ژنوم نیاز دارید. بسته به نمونه موردنظر این استخراج میتواند متفاوت انجام شود. یکی از روش های استخراج DNA استفاده از کیت های تجاری میباشد که شرکت پویاژن آزما روشی را برای شما بهینه کرده که با هزینه ای اندک خلوص مناسبی از ژنوم را از نمونه های قارچ و مخمر حتی آنهایی که به سختی استخراج میشوند را به شما میدهد. در این مقاله شما را با نحوه استفاده از کیت استخراج DNA از قارچ و مخمر شرکت پویاژن آزما آشنا میکنیم.

لینک ویدیو در آپارات

 

بافرهای موجود برای استخراج DNA از قارچ

درابتدا ظرف های حاوی محلول های موردنظر را از جعبه کیت خارج کنید که باید این محلول ها داخل جعبه قرار داشته باشند.

Buffer L 15 ml
Buffer D 9 ml
Solvent Buffer 2.5 ml
RNase A 3

 

برای خرید کیت استخراج میتوانید از این لینک استفاده کنید. 

 

نکات استفاده از کیت استخراج DNA از قارچ و مخمر

کیت استخراج DNA از قارچ و مخمر شرکت پویاژن آزما قابل نگهداری در دمای محیط میباشد. فقط میکروتیوب حاوی Rnase باید درون فریزر نگهداری شود و به همین دلیل در ابتدا میکروتیوب حاوی Rnase را به بافر I اضافه کنید و به این صورت میتوانید آن را در یخچال نگهداری کنید.

همچنین دو ماده را قبل از شروع کار باید آماده کنید. اتانول سرد ۹۶-۱۰۰ درصد و اتانول سرد ۷۰ درصد.

با این کیت شما میتوانید در زمان و هزینه سرفه جویی کنید و میزان خلوص DNA استخراجی شما بسیار بالاتر از بقیه روشها خواهد بود.

برای استخراج  DNA از قارچ و مخمر با استفاده از این کیت به ۳۰ دقیقه زمان نیاز دارید.

همچنین توجه داشته باشید که از هیچگونه ماده سمی و فنول استفاده نشده. DNA که با استفاده از این کیت استخراج میکنید میتواند برای تمامی تکنیک های مولکولی مانند PCR، کلونینگ ژن، تعیین توالی و… استفاده شود.

برای رفتن به صفحه فروشگاه و خرید کیت استخراج دلخواه خود از این لینک استفاده کنید.

 

پروتکل استخراج DNA از قارچ و مخمر

  1. ۳تا۵ میلی لیتر از قارچ یا مخمر کشت داده شده در محیط SDA یا محیط های مایع مناسب دیگر را درون میکروتیوب منتقل کنید

  2. به مدت یک دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید و محلول رویی را دور بریزید.

  3. ۳۰۰ میکرولیتر از بافر L را به رسوب مخمر و یا ۳۰ تا ۵۰ میلیگرم (وزن تر) از میسلیوم قارچ اضافه کرده و ۳-۴ دقیقه ورتکس کنید.

  4. ۱۸۰ میکرولیتر از بافر D را به میکروتیوب اضافه کرده و ۱۵ ثانیه سروته کنید. (پس از افزودن بافر D رسوب سفید رنگ مشاهده میشود.)

  5. ۸ تا ۱۰ دقیقه در ۱۳۰۰۰rpm سانتریفیوژ کنید.

  6. محلول رویی را به یک میکروتیوب جدید اضافه کنید. (نکته: مراقب باشید که رسوب را به میکرتیوب جدید وارد نکنید و اگر این اتفاق افتاد مرحله ۵ و ۶ را تکرار کنید.)

  7. دو برابر حجم مایعی که به میکروتیوب جدید منتقل کردید اتانول سرد ۹۶-۱۰۰ درصد اضافه کنید و به آهستگی ۵ بار سروته کنید.

  8. به مدت ۵ دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

  9. اتانول را دور بریزید و رسوب را نگه دارید.

  10. رسوب را با افزودن ۱۰۰-۲۰۰ میکرولیتر اتانول ۷۰ درصد و ۲-۳ بار سروته کردن شست و شو دهید.

  11. به مدت یک دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

  12. اتانول را دور ریخته و رسوب را در دمای اتاق به مدت ۱-۲ دقیقه خشک کنید.

  13. پس از خشک شدن رسوب و عدم حضور اتانول درون میکروتیوب، بسته به میزان رسوب، آن را در ۲۰ تا ۵۰ میکرولیتر از بافر Solvent حل کنید. رسوب را به خوبی در بافر حل کنید.

در نهایت این نمونه برای تمامی تست های مولکولی میتواند مورد استفاده قرار گیرد.

در نهایت میتوانید ژنوم استخراجی را روی ژل اگارز الکتروفورز کنید. آموزش الکتروفورز ژل آگارز را از اینجا بخوانید.

برای مراجعه به صفحه تصفیه فاضلاب صنعتی میتوانید از این لینک استفاده کنید .

 

ممنون از شما عزیزان که با مقاله آموزش استخراج DNA از قارچ و مخمر همراه ما بودید

نوشته‌های مرتبط

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.