استخراج RNA با ترایزول

در این مقاله از طرف پویاژن می خواهیم به موضوع استخراج RNA با ترایزول بپردازیم .

شما برای بررسی بیان یک ژن بصورت RNA ابتدا باید از نمونه موردنظر که میتواند بافت، سلول، خون و… باشد کل RNA را استخراج کنید. روشهای استخراج RNA متفاوتی وجود دارد که رایجترین آنها استفاده از ترایزول است.

مدتهاست که برای استخراج RNA از ®TRIzol استفاده می شود. تا آنجا که سایر شرکتهای تجاری معرف های مشابهی را با نامگذاری خاص خود ارائه می دهند . مانند TRI Reagent® ، RNAzol® ، QIAzol® ، TriPure ، TriSure و … .

این معرف یک قابلیت عالی برای لیز انواع نمونه های پیچیده را دارد. TRIzol® برای جابجایی ورودی های بسیار زیاد به راحتی مقیاس پذیر است . یعنی در حجم های کم و زیاد قابل استفاده است، میزان کافی RNA را بازیابی می کند . همچنین غیرفعال کننده مؤثر RNases است و از تخریب نمونه ها در هنگام استخراج RNA جلوگیری می کند.

با این وجود، موانع عمده ای در این روش پر زحمت وجود دارد . مانند استفاده از کلروفرم، زمان های طولانی سانتریفیوژ و نیاز به مراحل رسوب دهی در طی فرآیند جداسازی . این روش می تواند دست و پا گیر باشد و برای اطمینان از استخراج میزان کافی از آر ان ای از نمونه ها به مهارت فنی نیاز دارد.

 برای خرید کیت استخراج DNA وارد فروشگاه کیت استخراج شوید 

®TRIzol معرفي بر پايه اسيد-گوانيدينيوم-فنول است كه براي استخراج RNA (و همچنين DNA و پروتئين) از ورودي هاي مختلف نمونه بيولوژيك طراحي شده است . pH پایین (اسیدی) ® TRIzol باعث می شود RNA از DNA و پروتئین جدا شود . در حالی که pH بالا می تواند باعث جدا شدن RNA و DNA با هم شود و RNA و DNA را از هم جدا نمی کند . نمک گوانیدینیم به عنوان یک عامل کاتروپیک برای بهم زدن ساختار پروتئین ها و دینیچر شدن آن ها عمل می کند و فنل (که معمولاً به رنگ صورتی دیده می شود) یک ترکیب آلی است که برای استخراج اسیدهای نوکلئیک و پروتئین نیز استفاده می شود.

تصویری از مرحله ای که سه فاز محلول در میکروتیوب دیده میشود که فاز آبی حاوی RNA است و با ایزوپروپانول میتوان RNA محلول را رسوب داد

مواد موردنیاز:

آب مقطر DEPC (Rnase Free)

TRIzol

بافر PBS سرد

اتانول ۷۰٪

ایزوپروپیل الکل

ابزارهای موردنیاز:

سانتریفیوژ یخچال دار

میکروفیوژ

سمپلر

سرسمپلرهای Rnase free

وورتکس

دستکش بدون پودر

میکروتیوب Rnase free

نکته حفاظتی:

درطول کار حتما از دستکش و محافظ چشم استفاده کنید . زیرهود کار کنید و بخار ترایزول را تنفس نکنید .

مراحل کار به صورت زیر است :

• هموژنیزه کردن نمونه  برای استخراج RNA

• جداسازی فازها برای استخراج RNA

• رسوب RNA

• شست و شوی RNA

• رسوب دوباره ی RNA

• بررسی خلوص RNA استخراج شده توسط استپکتوفوتومتر

پروتکل تمامی مراحل استخرج RNA

طی مراحل بالا یعنی در شش مرحله این کار یعنی استخراج صورت می گیرد . هر یک از مراحل توضیحاتی دارد . در قسمت دوم این مقاله به توضیحات می پردازیم و راجع به هر یک شرحی خواهیم داشت تا به طور کامل این مطلب برای شما همراهان پویاژن به خوبی هر چه تمام تر جا بیفتد .

برای مراجعه به صفحه تصفیه فاصلاب صنعتی میتوانید از این لینک استفاده کنید .

برای مطالعه ی بیشتر در این زمینه به اینجا بروید . همچنین برای دریافت مقاله در همین موضوع نیز می توانید اینجا را بزنید و سپس مقاله را دریافت بفرمایید .