آموزش

نکات مهم در کشت سلول

قبل از ورود به اتاق کشت و کار با سلول و یا بافت باید حتما یک سری نکات رو رعایت کنید. اگه قراره با سلول یا بافت کار کنید حتما این مقاله رو تا آخر بخونید. نکاتی گفته میشه که خیلی لازم دارید و خیلی از اونا بصورت تجربی بدست میاد.

آموزش نکات مهم برای کشت سلول و بافت و کار در اتاق کشت

قبل از ورود

اتاق کشت به این صورته که وقتی وارد میشید اول یه بخش داره که باید روپوشتون رو بپوشید (مثل هر آزمایشگاهی باید حتما روپوش تمیز بپوشید و هیچوقت با لباس بیرون با سلولها کار نکنید وگرنه احتمال آلودگی زیاد میشه)، دستاتون رو بشورید و دستکش دست کنید. برای ورود به بخش بعدی اتاق کشت دمپایی مخصوص یا کاور کفش بپوشید. در این بخش معمولا بن ماری، کمد حاوی وسیله های آزمایش، یخچال و فریزر قرار دارد. دقت کنید که درها رو حتما پشت سرتون ببنیدید تا هوا به درستی جریان پیدا کنه و استریل بشه (نسبت به سطح اتاق کشت).

بسته به کاری که میخواید انجام بدید وسیله ها و مواد مورد نیازتون رو از کمد و یخچال فریزر بردارید. پلاستیک فریزر، پارافیلم، اسپری الکل ۷۰ درصد و گاز استریل یا دستمال برای تمیز کردن هم یادتون نره (معمولا اینا جا میمونن). حالا وارد بخش اصلی اتاق کشت بشید.

 

شمای کلی از آزمایشگاه کشت سلول

تصویر ۳ بخش اتاق کشت سلول و وسایلی که در هر بخش قرار دارد

داخل بخش اصلی اتاق کشت

وقتی وارد بخش اصلی اتاق کشت شدید این دستگاه ها رو مشاهده میکنید (حداقل امکانات لازم):

  1. هود لامینار
  2. انکوباتور CO2 دار مخصوص کشت سلول
  3. میکروسکوپ اینورت
  4. سانتریفیوژ

اول از همه برای کشت سلول با هود لامینار کار دارید و باید زیر هود رو استریل کنید. اول هود رو روشن  کنید، دکمه لامپ و هود رو بزنید. زیر هود را الکل بپاشید و با گاز استریل کامل تمیز کنید. وسیله های مورد نظرتون (نه مواد) رو که اتوکلاو شده هستند یا یک بار مصرف و استریل هستند رو با الکل تمیز کنید و زیر هود بذارید. درب هود رو ببندید، کلید لامپ و هود رو خاموش کنید و لامپ UV رو روشن کنید. حدود ۱۰ تا ۲۰ دقیقه اجازه بدید تا زیر هود استریل بشه.

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

مواد مورد استفاده

در مدتی که هود استریل بشه، موادی که برای کشت سلول لازم دارید (بسته به کارتون) رو آماده کنید و اگر محیط آماده و کامل ندارید، باید محیط کشت، سرم (برای مثال میتونید از FBS یا سرم جنین گاوی استفاده کنید) و آنتی بیوتیک penstrep (مخلوط پنی سیلین و استرپتومایسین که باکتریهای گرم مثبت و منفی رو ازبین ببرن) رو از یخچال (محیط کشت) و فریزر (آنتی بیوتیک و سرم) خارج کنید. و داخل بن ماری با دمای ۳۷ درجه سانتی گراد قرار بدید. هر محیط کامل شامل ۱۰ درصد سرم و ۰/۱ درصد آنتی بیوتیک میشود.

برای کشت سلول باید حتما محیطی که روی سلولها میخواید بریزید گرم باشه و به ۳۷ درجه رسیده باشه وگرنه به سلولها شوک وارد میشه.

۸ نکته مهم برای کشت سلول

بطور کلی برای کشت سلولها ۸ نکته رو باید رعایت کنید:

  1. قبل از شروع کار وقتی لامپ UV رو خاموش کردید، هود رو روشن و درب هود رو باز کنید و بذارید حدود ۱۰ دقیقه هود باز بمونه تا اوزون های تشکیل شده داخل محیط نباشن.
  2. هنگام کار زیر هود هر وسیله ای که از خارج از هود وارد میشه، حتی دستتون، باید الکل کشی بشه.
  3. حتما هر ماده ای که میخواید روی سلولهاتون بریزید رو به دمای ۳۷ درجه برسونید وگرنه به سلولها شوک وارد میشه.
  4. موقع حمل فلاسکی که سلول در اون قرار داره حتما اوریب اونو نگه دارید و مواظب باشید که محیط کشت به درب فلاسک برخورد نکنه (اگه فلاسک فیلتردار باشه فیلتر آلوده میشه و باید سریع درب و محیط کشت رو عوض کنید و ترجیحا فلاسک رو تعویض کنید) و به گونه ای نباشه که روی سلولها هیچ محیطی نباشه ( اگه طول بکشه به سلولها شوک وارد میشه و نباید زیاد در مجاورت هوا قرار بگیرن و خشک باشند.
  5. حتما با روپوش تمیز و دستکش کار کنید.
  6. هر سلول قلق خاص خودش رو داره و شما باید باهاش خیلی با مراعات کار کنید تا بفهمید چه شرایطی براش بهتره.
  7. سعی کنید هر روز یا حداکثر یک روز درمیون به سلول هاتون سر بزنید تا اگه به تعویض محیط نیاز دارند (که با زرد شدن محیط مشخص میشه) یا تراکم اونها زیاد شده، پاساژشون بدید.
  8. بعد از استفاده از موادتون حتما درب فالکون ها رو پارافیلم بزنید. محیط کشت (کامل وغیرکامل) رو در یخچال و تریپسین، سرم و آنتی بیوتیک رو در فریزر قرار بدید.

میتوانید اصول کشت سلول رو در سایت ترموفیشر به زبان انگلیسی با توضیحات کاملتر بخونید.

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

نوشته های مشابه

یک نظر در مورد

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *