آموزش

پاساژ سلولها

پاساژ سلول

در این بخش مراحل پاساژ سلول ها و تمامی نکاتی که برای پاساژ سلول به آن نیاز دارید آورده شده است.

وقتی سلولهایی که کشت دادید به تراکم بالای ۷۰ درصد برسند باید اونها رو پاساژ بدید. به این معنی که سلولها رو مجدد کشت بدید. برای پاساژ سلولهای چسبنده طبق ویدئوی زیر عمل کنید. یادتون نره تمامی وسایل یکبار مصرف باید استریل باشند و هر وسیله ای رو وارد هود میکنید حتما الکل کشی کنید.

برای پاساژ سلولها ابتدا مانند هرکار دیگری که با سلول قرار است انجام شود، محیط هود را با الکل استریل کرده و وسایل مورد نیاز را هم پس از الکل کشی زیر هود قرار میدهید و لامپ UV را به مدت ۲۰ دقیقه روشن کنید تا محیط برای کار با سلول و پاساژ سلولها کاملا استریل شود (هنگامی که لامپ UV روشن است درب هود بسته و فن را خاموش کنید.)

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

وسایل مورد استفاده پاساژ سلول :

  • سمپلر هزار متغیر
  • رک حاوی سرسمپلرهای آبی (هزار)
  • فالکون سانتریفیوژ
  • فلاسک مورد نیاز برای پاساژ سلولها

فراموش نکنید که در این بین تریپسین، محیط کشت کامل (حاوی FBS) و بافر برای شست و شو ( مانند بافر PBS) را در بن ماری با دمای ۳۷ قرار دهید.

مراحل پاساژ سلول :

ابتدا فلاسک حاوی سلول را زیر میکروسکوپ اینورت بررسی کنید تا مطمئن شوید سلولها به تراکم مناسب رسیده باشند. سپس فلاسک را با احتیاط زیر هود برده و محیط کشت را دور بریزید. سپس با بافر سلولها را بشویید تا سلولهای مرده ی شناور را خارج کنید. سپس برای کندن سلولها از کف فلاسک مقدار مناسب از تریپسین (بسته به نوع سلول و حجم فلاسک) را بطور کامل روی سلولها پخش کنید. برای مثال در فلاسک T25 حاوی سلولهای سرطانی میتوانید ۲۰۰ تا ۵۰۰ میکرولیتر از تریپسین بریزید. سپس در انکوباتور قرار دهید تا تریپسین عمل کند.

پس از خروج فلاسک و زدن یک ضربه آهسته آن را زیر میکروسکوپ بررسی کنید تا مطمئن شوید سلولها از کف فلاسک کنده شدند. سریع به هود منتقل کنید و محیط کشت کامل را به اندازه دو برابر حجم تریپسین به آن اضافه کنید تا سرم داخل آن تریپسین را مهار کند وگرنه میتواند به سلولها آسیب بزند.

سلول های کنده شده را کاملا با محیط کشت جمع کرده و به فالکون سانتریفیوژ وارد کنید. سپس به مدت ۵ دقیقه در ۱۳۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

محیط رویی را دور ریخته و پلت سلولی را در یک سی سی محیط کشت حل کنید.

در مرحله بعد باید شمارش سلولی انجام دهید که میتوانید از اینجا روش انجام شمارش سلولها را ببینید. پس از شمارش سلولها تعیین کنید که چه مقدار از سوسپانسیون را برای رشد مناسب سلولها در مدت زمان موردنیازتان به فلاسک وارد کنید یا در چند فلاسک تقسیم کنید. در این مرحله میتوانید برای انجام تست های بیشتر سلول ها را در پلیت های مختلف پخش کنید . سپس میزان مناسب از محیط کامل را اضافه کرده و فلاسک را در انکوباتور قرار دهید.

ممنون از شما که با مقاله پاساژ سلول ها ما را همراهی کردید .

برای خرید کیت استخراج کلیک کنید

نوشته های مشابه

یک نظر در مورد

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *