آموزش رایگان, تکنیک های پر کاربرد مولکولی, تکنیک های مولکولی

آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها

آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها

در این مقاله از پویاژن میخواهیم به سراغ آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها برویم

برای استخراج DNA از باکتری بهترین راه رو براتون اپتیمایز کردیم و داخل این فیلم با تمام نکاتی که لازم دارید تا به هر روشی استخراج کنید آوردیم. این نکات رو توی هیچ کتابی پیدا نمیکنید و همشون تجربی بدست اومده که تیم ما رایگان در اختیارتون گذاشته.

برای انجام بسیاری از آزمایشات مولکولی شما به استخراج ژنوم دارید. بسته به نمونه موردنظر این استخراج میتواند متفاوت انجام شود. یکی از روش های استخراج DNA استفاده از کیت های تجاری میباشد که شرکت پویاژن آزما روشی را برای شما بهینه کرده که با هزینه ای اندک خلوص مناسبی از ژنوم را از نمونه های باکتری، اعم از گرم منفی و مثبت حتی با کتریهایی که به سختی استخراج میشوند را به شما میدهد. در این مقاله شما را با نحوه استفاده از کیت استخراج DNA از باکتری شرکت پویاژن آزما آشنا میکنیم.

 

بافرهای موجود برای استخراج DNA از باکتری

درابتدا ظرف های حاوی محلول های موردنظر را از جعبه کیت خارج کنید که باید این محلول ها داخل جعبه قرار داشته باشند.

Buffer I 5.5 ml
Buffer II 11 ml
Buffer III 8 ml
Buffer X 10 ml
Solvent Buffer 6 ml
RNase A

نکات استفاده از کیت استخراج DNA

کیت استخراج DNA از باکتری شرکت پویاژن آزما قابل نگهداری در دمای محیط میباشد. فقط میکروتیوب حاوی Rnase باید درون فریزر نگهداری شود و به همین دلیل در ابتدا میکروتیوب حاوی Rnase را به بافر I اضافه کنید و میتوانید آن را در یخچال نگهداری کنید.

همچنین دو ماده را قبل از شروع کار باید آماده کنید. اتانول سرد ۹۶-۱۰۰ درصد و اتانول سرد ۷۰ درصد.

با این کیت شما میتوانید در زمان و هزینه سرفه جویی کنید و میزان خلوص DNA استخراجی شما بسیار بالاتر از بقیه روشها خواهد بود.

برای استخراج  DNA از باکتریها با استفاده از این کیت به ۷۰ دقیقه زمان نیاز دارید.

همچنین توجه داشته باشید که از هیچگونه ماده سمی، لیزوزیم، لیزوزتافین و فنول استفاده نشده. DNA که با استفاده از این کیت استخراج میکنید میتواند برای تمامی تکنیک های مولکولی مانند PCR، کلونینگ ژن، تعیین توالی و… استفاده شود.

برای رفتن به صفحه فروشگاه و خرید کیت استخراج دلخواه خود از این لینک استفاده کنید.

 

پروتکل استخراج DNA از باکتری

  • ۳تا۵ میلی لیتر از باکتری کشت داده شده در محیط مایع را به مدت یک دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

  •   رسوب را در ۱۰۰ میکرولیتر از بافر I حل کنید.

  • ۲۰۰ میکرولیتر از بافر II را به میکروتیوب اضافه کنید.

  • ۱۵۰ میکرولیتر از بافر III را به میکروتیوب بیافزایید و به آهستگی ۳ بار سروته کنید. (اگر باکتری شما گرم مثبت است نمونه را به مدت ۴۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه کنید.

  • ۱۸۰ میکرولیتر از بافر X را به تیوب افزوده و ۱۰ بار سروته کنید. (وقتی بافر X را به نمونه اضافه میکنید یک رسوب سفید ایجاد میشود)

  • به مدت ۱۰ دقیقه در ۱۳۰۰۰rpm سانتریفیوژ کنید.

  • محلول رویی را به یک میکروتیوب جدید اضافه کنید. (نکته: مراقب باشید که رسوب را به میکرتیوب جدید وارد نکنید و اگر این اتفاق افتاد مرحله ۵ و ۶ را تکرار کنید.)

  • دو برابر حجم مایعی که به میکروتیوب جدید منتقل کردید اتانول سرد ۹۶-۱۰۰ درصد اضافه کنید و به آهستگی ۵ بار سروته کنید.

  • به مدت ۵-۸ دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

  • اتانول را دور بریزید و رسوب را نگه دارید.

  • رسوب را با افزودن ۱۰۰-۵۰۰ میکرولیتر اتانول ۷۰ درصد و ۲-۳ بار سروته کردن شست و شو دهید.

  • به مدت یک دقیقه در ۱۳۰۰۰ دور سانتریفیوژ کنید.

  • اتانول را دور ریخته و رسوب را در دمای اتاق به مدت ۱-۲ دقیقه خشک کنید.

  • پس از خشک شدن رسوب و عدم حضور اتانول درون میکروتیوب، رسوب را در ۲۰ تا ۵۰ میکرولیتر از بافر Solvent حل کنید. رسوب را به خوبی در بافر حل کنید.

در نهایت این نمونه برای تمامی تست های مولکولی میتواند مورد استفاده قرار گیرد.

آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها

DNA استخراجی با استفاده از کیت استخراج DNA از باکتری که روی ژل آگارز ۱ درصد لود شده است.

نمونه شماره یک لیستریا، نمونه شماره دو باسیلوس سوبتیلیس، نمونه شماره سه Streptococcus agalactiae و نمونه شماره چهار Staphylococcus aureus

برای آموزش الکتروفورز ژل آگارز کلیک کنید.

برای رفتن به تصفیه فاضلاب صنعتی  از این لینک استفاده کنید.

 

ممنون از همراهی گرم شما برای مطالعه آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها . میتوانید برای مطالعا بیشتر به این لینک نیز بروید

نوشته‌های مرتبط

One thought on “آموزش استخراج DNA از باکتری‌ها

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.