مشاهده باکتری زیر میکروسکوپ

برای کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی میکروارگانیسم ها را بصورت زده و مرده (رنگ آمیزی شده) با استفاده از میکروسکوپ مشاهده کنیم. در مقالات قبل درباره نکاتی که باید برای کار در آزمایشگاه میکروبیولوژی بدانید و تمامی وسایل و دستگاه های مورد استفاده توضیح داده شد. همچنین میتوانید درباره انواع محیط کشت و نحوه جداسازی میکروارگانیسم ها از محیط های مختلف مطالعه کنید. در این مقاله آزمایشگاه همکار پویاژن آزما تنها آزمایشگاه همکار دارای دامنه شناسایی پروبیوتیک و تولید کننده انواع کیت استخراج DNA و محصولات بیوتکنولوژی، تلاش کرده تا روش مشاهده میکروارگانیسم ها بصورت زنده را به شما آموزش دهد.

کیت استخراج DNA از باکتری تولیدی پویا ژن آزما از سخت ترین نمونه های باکتری مانند استافیلوکوکوس اورئوس با کیفیت بالا استخراج کرده و نتایج PCR و تعیین سکانس عالی خواهید داشت. با به صرفه ترین قیمت و بیشترین کیفیت.

خرید آنلاین کیت استخراج DNA از انواع نمونه ها و محصولات مولکولی

مشاهده میکروسکوپی میکروب ها به حالت زنده یا رنگ آمیزی نشده

این روش برای بررسی فعالیت هایی چون حرکت میکروب ها و تقسیم دوتایی و همچنین بررسی اندازه وشکل طبیعی سلول میکروب بکار می رود.

روش گسترش مرطوب (wet mount)

در این روش ابتدا بر روی یک قطعه لام ساده و تمیز قطره از سوسپانسیون حاوی میکروب قرارداده و بر روی آن لامل قرار می دهند. سپس گسترش را در زیر میکروسکوپ ابتدا با عدسی 10 و سپس 40 مشاهده می کنند.

روش قطره معلق (Hanging drop)

در این روش از لام توگود استفاده می شود. ابتدا مقداری وازلین در اطراف حفره وسط لام قرارداده وسپس یک قطره کوچک از سوسپانسیون نمونه را بر روی لامل قرارمی دهند و لامل را بصورت معکوس در محلی که وازلین وجود دارد قرارداده ودر زیر میکروسکوپ ابتدا باعدسی 10 وسپس 40 بررسی می کنند.

نکات مهم

1. حتما بر روی سوسپانسیون لامل گذاشته شود.
2. چون میکروب ها رنگ آمیزی نشدند وضریب شکست معادل شیشه دارند، برای رویت آن ها باید نور میکروسکپ را کم کرد (با بستن دیافراگم و پایین کشیدن کندانسور)
3. چون در این روش مقدار نمونه محدود است، قبل از خشک شدن نمونه، باید آن را بررسی کرد.

پروتکل مشاهده میکروسکوپی باکتری های زنده

هدف: انجام روش قطره معلق بمنظور مشاهده باکتری های زنده

اصول مشاهده میکروسکوپی

باکتری ها بواسطه اندازه کوچک و ضریب انعکاسی تقریباً نزدیک به ضریب انعکاس آب به آسانی در حالت رنگ آمیزی نشده قابل رویت نیستند ولیکن این بررسی چند مزیت دارد.

1. مشاهده فعالیت هایی چون حرکت و تقسیم دوتایی.
2. مشاهده اندازه و شکل طبیعی سلول های جدا که حرارت فیکساسیون و در معرض قراردادن باکتری ها به مواد شیمیایی در زمان رنگ آمیزی، شکل سلول را در هم می ریزد.

در این آزمایش دانشجویان از مخلوط دو باکتری که در مقاله قبل روش تهیه کشت خالص از آن ها را میتوانید مطالعه کرده استفاده نموده. یک سوسپانسیون باکتریایی مخلوط تهیه می کنند تا به روش قطره معلق آن را بررسی کنند. دانشجو موظف است بین اندازه و شکل سلول ها تمایز قائل شود و به علاوه حرکت باکتری ها زیر میکروسکوپ و توانایی حرکت را بررسی کند. لازم به تذکر است که حرکت را نباید با حرکت براونی (که ناشی ازبرهم خوردن مولکول های آب و باکتری است) اشتباه کرد.

کشت های باکتری های مورد استفاده باید از کشت 24 ساعته تهیه شده باشد.

لوازم مورد نیاز برای مشاهده میکروستکوپی باکتری ها

لام تو گود، لامل، لوپ تلقیح، شعله گازی، میکروسکوپ، لوله سر پیچ دار.

روش مشاهده میکروسکوپی باکتری ها

1. شعله گاز راروشن کنید
2. اطراف گودی موجود درلام را باوازلین آغشته کنید (a).
3. بصورت استریل روی لامل شیشه ای قطره ای کوچک از آب قرارداده و یک کلنی به قطره آب موجود روی لام انتقال داده آن را سوسپانسیون کنید (b).
4. این لام را به طور معکوس روی لامل قراردهید، به طوری که گودی درست روی قطره باشد (c) .
5. فشارکوچکی برآن وارد ساخته، سپس لام را برگردانید (d) .
6. برای مشاهده میکروسکوپی ابتدا عدسی باقدرت پایین استفاده شود سپس یک قطره روغن ایمرسیون روی لامل قرارداده و با عدسی 100 مشاهده شود.

روش آماده کردن قطره معلق

امیدواریم این مقاله برای شما مفید بوده و انواع کشت باکتری را یاد گرفته باشید. اگر به میکروبیولوژی صنعتی علاقمندید میتوانید درباره نحوه انتخاب سویه های باکتری برای صنعت و رنگ آمیزی باکتری ها نیز مطالعه کنید.